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wuhao4850103

银虫 (著名写手)

[交流] 荧光定量PCR扩增后溶解曲线出现杂峰

本人最近在做荧光定量PCR实验,用的引物和以前的一样,只是cDNA模板不同,但是最近实验时发现扩增后的溶解曲线出现了或大或小的杂峰,以前用这些引物扩增的时候溶解曲线里面基本上没有杂峰。所以,我想会不会是由于每次做实验的时候都要把稀释后的引物从负20度拿出来,然后融化一部分,结果引物反复冻融以后造成了这种现象,引物反复冻融会影响其扩增的特异性吗?
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嘻嘻哈哈
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太阳的电子

新虫 (小有名气)

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wuhao4850103: 金币+5 2016-11-29 20:09:47
CT值多大?如果样品浓度太少的话会出现菲特异性扩增

发自小木虫Android客户端
3楼2016-11-29 00:01:04
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娟恋幸福

新虫 (小有名气)

★ ★ ★ ★ ★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
wuhao4850103: 金币+5 2016-11-29 20:11:14
会不会样品降解了

发自小木虫Android客户端
4楼2016-11-29 00:08:11
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wuhao4850103

银虫 (著名写手)

引用回帖:
3楼: Originally posted by 太阳的电子 at 2016-11-29 00:01:04
CT值多大?如果样品浓度太少的话会出现菲特异性扩增

CT值大概在30左右,不过同样的引物,上次的CT值在35左右却没有出现明显的杂峰。
嘻嘻哈哈
6楼2016-11-29 20:09:38
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wuhao4850103

银虫 (著名写手)

引用回帖:
4楼: Originally posted by 娟恋幸福 at 2016-11-29 00:08:11
会不会样品降解了

这次的cDNA是刚刚逆转录的,之前也就用过一次。
嘻嘻哈哈
7楼2016-11-29 20:11:07
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