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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » PCR相关 » 荧光定量PCR扩增后溶解曲线出现杂峰
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wuhao4850103

银虫 (著名写手)

[交流] 荧光定量PCR扩增后溶解曲线出现杂峰

本人最近在做荧光定量PCR实验，用的引物和以前的一样，只是cDNA模板不同，但是最近实验时发现扩增后的溶解曲线出现了或大或小的杂峰，以前用这些引物扩增的时候溶解曲线里面基本上没有杂峰。所以，我想会不会是由于每次做实验的时候都要把稀释后的引物从负20度拿出来，然后融化一部分，结果引物反复冻融以后造成了这种现象，引物反复冻融会影响其扩增的特异性吗？
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嘻嘻哈哈
1楼 2016-11-28 21:34:45
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gengxin60
★ ★ ★ ★ ★
wuhao4850103: 金币+5 2016-11-29 20:11:43
祝福
2楼2016-11-28 21:52:03
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太阳的电子

新虫 (小有名气)
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wuhao4850103: 金币+5 2016-11-29 20:09:47
CT值多大？如果样品浓度太少的话会出现菲特异性扩增

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3楼2016-11-29 00:01:04
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娟恋幸福

新虫 (小有名气)
★ ★ ★ ★ ★ ★
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wuhao4850103: 金币+5 2016-11-29 20:11:14
会不会样品降解了

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4楼2016-11-29 00:08:11
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rfhmte72
★ ★ ★ ★ ★
wuhao4850103: 金币+5 2016-11-29 20:11:29
祝福
5楼2016-11-29 02:14:25
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wuhao4850103

银虫 (著名写手)
引用回帖:
3楼: Originally posted by 太阳的电子 at 2016-11-29 00:01:04
CT值多大？如果样品浓度太少的话会出现菲特异性扩增

CT值大概在30左右，不过同样的引物，上次的CT值在35左右却没有出现明显的杂峰。
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6楼2016-11-29 20:09:38
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wuhao4850103

银虫 (著名写手)
引用回帖:
4楼: Originally posted by 娟恋幸福 at 2016-11-29 00:08:11
会不会样品降解了

这次的cDNA是刚刚逆转录的，之前也就用过一次。
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7楼2016-11-29 20:11:07
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雷杰晓月

新虫 (初入文坛)
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wuhao4850103: 金币+5 2016-12-01 13:16:36
CDNA质量不好吧？
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8楼2016-12-01 11:12:32
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wuhao4850103

银虫 (著名写手)
引用回帖:
8楼: Originally posted by 雷杰晓月 at 2016-12-01 11:12:32
CDNA质量不好吧？

我之前也用过这一批的cDNA扩增过，不过用其他的引物，最后的熔解曲线还都比较正常。

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9楼2016-12-01 13:16:10
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叹汁杰

新虫 (初入文坛)
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wuhao4850103: 金币+5 2016-12-01 23:16:11
ct值去到35,肯定就是这个模版的这个基因浓度太低了，模版浓度高一般不会出现这种问题

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10楼2016-12-01 18:39:18
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