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晏育伟

铜虫 (初入文坛)

[求助] 荧光定量PCR

请大家帮忙看看我的实验是哪里出问题了。
本人现在在做一种寄生虫的某个目的基因在感染宿主后不同时期的表达量差异。设计实验如下，直接提取寄生虫RNA和不同感染时期寄主中肠组织RNA（四个时期），反转录成cDNA；根据目的基因设计RT-PCR引物（经验证，该引物的特异性很好），以寄生虫β-tubulin为内参基因，做RT-PCR；实验过程中直接提取寄生虫RNA的样品有很好的扩增曲线和溶解曲线，但是提取的中肠组织RNA样品却什么都没有？我的实验操作，试剂，引物和RT-PCR条件都没有问题，初步怀疑中肠组织中没有提取出该寄生虫的RNA，用RT-PCR引物直接做普通PCR，能扩增出目的基因和内参基因，且条带非常亮，没有非特异性带。请问这是什么原因呢？
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1楼 2013-03-28 16:22:55
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