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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » PCR相关 » 有关荧光定量PCR流程的问题
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cherish-木

金虫 (小有名气)

[求助] 有关荧光定量PCR流程的问题 已有1人参与

在做实时荧光定量PCR的试验，测定不同处理对果蔬目的基因表达的差异。
这个一般步骤是：提总RNA——反转录——普通PCR——荧光PCR。这中间做普通PCR的目的是为了检测产物的扩增效率吧，
但也有人说也可以省去这一步骤直接上荧光后面再分析，我有点不太理解，想请教各位采用过这种方法的能给与详细步骤的解答。
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最爱是特别
1楼 2014-12-12 17:25:24
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fuchange918

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
myprayer: 金币+1, 赠人玫瑰手有余香，分子生物期待你更多精彩。 2014-12-12 18:51:38
普通PCR的目的不是为了看扩增效率的，是为了摸索引物大体的退火温度。
扩增效率的获得由两种方法：
（1）做标准曲线
（2）根据扩增曲线通过软件计算
赞一下(1人) 回复此楼
2楼2014-12-12 18:29:29
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