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cherish-木

金虫 (小有名气)

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专业: 食品科学基础

[求助] 有关荧光定量PCR流程的问题已有1人参与

在做实时荧光定量PCR的试验，测定不同处理对果蔬目的基因表达的差异。
这个一般步骤是：提总RNA——反转录——普通PCR——荧光PCR。这中间做普通PCR的目的是为了检测产物的扩增效率吧，
但也有人说也可以省去这一步骤直接上荧光后面再分析，我有点不太理解，想请教各位采用过这种方法的能给与详细步骤的解答。

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最爱是特别

1楼 2014-12-12 17:25:24

已阅回复此楼关注TA 给TA发消息送TA红花 TA的回帖

fuchange918

木虫 (正式写手)

应助: 33 (小学生)
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性别: GG
专业: 食用真菌学

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
myprayer: 金币+1, 赠人玫瑰手有余香，分子生物期待你更多精彩。 2014-12-12 18:51:38

普通PCR的目的不是为了看扩增效率的，是为了摸索引物大体的退火温度。
扩增效率的获得由两种方法：
（1）做标准曲线
（2）根据扩增曲线通过软件计算

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