24小时热门版块排行榜    

查看: 2372  |  回复: 8

Yuanfang_818

金虫 (小有名气)

[求助] 双酶切 胶回收 已有5人参与

质粒提取后双酶切4h,跑胶后,条带很暗,但是切来了,胶回收浓度很低,是胶回收的不好吗,道友指导一下,怎么办?

发自小木虫Android客户端
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐,对您同样有帮助:

已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

xiaoxulittle

新虫 (小有名气)


xn8008: 金币+1, 欢迎发帖交流 2016-08-01 07:25:31
用的什么内切酶,切这么久?初始质粒有多少?MARKER条带如何?可否给个图?

发自小木虫Android客户端
2楼2016-07-31 22:20:10
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

Yuanfang_818

金虫 (小有名气)

引用回帖:
2楼: Originally posted by xiaoxulittle at 2016-07-31 22:20:10
用的什么内切酶,切这么久?初始质粒有多少?MARKER条带如何?可否给个图?

用的内切酶是Sac l和Hind lll,实验室一般是酶切4h,他们做的也不是很亮。质粒,20的体系加1ug,50的体系加1.5ug,好像20的体系要好一些。跑胶后,大片段很亮,我要的小片段不亮。也可能我胶回收的不好,自己觉得胶溶解的时间有点长了,其他的应该没啥了。

发自小木虫Android客户端
3楼2016-08-01 08:21:44
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

不爱做实验

银虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与,应助指数 +1
Yuanfang_818: 金币+2, ★★★很有帮助 2016-08-02 10:52:53
1、酶切时间2-3h即可
2、加大酶切的样品量
3、电泳时间不需要i太长,只要能分开条带即可
4、回收一般没什么问题,保证按步骤操作即可
4楼2016-08-01 11:02:00
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

小冀-

版主 (著名写手)

优秀版主优秀版主

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与,应助指数 +1
Yuanfang_818: 金币+2, ★★★很有帮助 2016-08-02 10:53:24
你都说了,条带很暗,估计回收出来浓度也不会太高~以后酶切的时候在不超量的情况下尽量多加点质粒,切时间长点也没关系的,这样回收浓度比较高,后续实验也方便做~
···
5楼2016-08-02 10:22:12
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

swgcpy

至尊木虫 (著名写手)

快切酶37℃一小时足矣,慢切酶要比较彻底的话最好过夜。另外切完直接跑胶条带很暗的话就不是回收的问题了,是开始反应的质粒量就比较少

发自小木虫Android客户端
6楼2016-08-03 00:25:23
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

cry_2013

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与,应助指数 +1
Yuanfang_818: 金币+2 2016-08-03 17:33:31
酶切后跑胶条带都不亮,会不会是你提的质粒浓度就低呀?
7楼2016-08-03 08:54:18
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

十四_14

荣誉版主 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与,应助指数 +1
Yuanfang_818: 金币+2 2016-08-03 17:32:34
一般来说  胶回收这一步 只要按照步骤来  溶液没问题  是不会有什么问题的

我觉得可能你的酶切产物本来浓度就不高  回收后会有一点损失  所以条带不亮  多切几管吧
8楼2016-08-03 11:11:31
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

feierorange

铜虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
不知道你说的小片段是指多小,以我的经验,双酶切胶回收电泳时,小片段是会比较弱,如果担心的话,可以采用楼上所说多切几管。
9楼2016-08-03 13:21:55
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 Yuanfang_818 的主题更新
信息提示
请填处理意见