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银虫 (初入文坛)

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[求助] 蛋白表达出现包涵体

在做蛋白表达的时候，结果全是包涵体
1、我的基因序列是经过密码子优化过的，基因序列没有稀有密码子。
2、按照之前文章上面的去做表达，全是包涵体。
3、优化过温度、转速、加葡萄糖、乙醇、甘油还是包涵体。
4、换过表达宿主BL21和Rosetta也全是包涵体。
请教各位大神，还该如何改进，才能减少包涵体?

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相信自己

1楼 2016-07-12 15:31:49

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Edgel

新虫 (初入文坛)

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引用回帖:

7楼: Originally posted by 小鼹鼠 at 2016-07-15 10:39:48
你好！请问你是怎么做的呢？有没有比较详细的protocol之类？我的蛋白也一直在沉淀里，我想尝试做一下复性。但是我们实验室也没人做过，怕一些细节问题我注意不到。可以分享一下吗？多谢~~...

有一本很大很厚书叫蛋白纯化指南，上面关于蛋白质的各种方法技术都可以查阅到。我当时做包涵体就是得益于它，不过不同的蛋白，其分子量、配体等各方面性质不一样，有些很容易复性，另一些很难复性。我比较幸运，第一次尝试就成功了，我是直接把包涵体溶解在8M的Urea中，然后透析，检测出足够的活性后再进行蛋白纯化。