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dy_414

木虫 (正式写手)

[求助] 关于蛋白多聚

本人做膜蛋白,发现如下现象:
1. 真核表达,用12% SDS-PAGE接WB检测,发现目的蛋白都在膜的最上面,增加DTT的含量也一样(确定不是检测抗体非特异性吸附),但目的位置有较浅的条带。

2. 原核表达C末端片段,包涵体形式,PB(pH6.2)下复性后SDS-PAGE鉴定出现多聚(应该不是二硫键导致,因为确定有DTT)

请问如下原因:
1. 能否猜测是何种情况导致多聚(基本可以排除疏水作用和二硫键)
2. 如何对真核表达的样品进行处理使其出现在目的位置

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我坚信,rp是攒出来的
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dy_414

木虫 (正式写手)

自己顶一下
我坚信,rp是攒出来的
2楼2012-10-29 17:02:42
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dy_414

木虫 (正式写手)

再顶一下
3楼2012-11-03 21:31:28
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dy_414

木虫 (正式写手)

再顶下,嘿嘿

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
我坚信,rp是攒出来的
4楼2012-11-05 23:18:33
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悠悠落叶

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★
dy_414: 金币+2, ★★★很有帮助 2012-11-06 20:47:36
膜蛋白一般的都比较疏水吧,尤其是跨膜的那一段,可能是因为疏水相互作用造成的多聚的形成,所以说要是由于疏水太强造成的多聚加入DTT当然是不管用的,而且这类蛋白是不是还比较难溶解,具体的方法你再找找吧,适合你做实验的解决方法
索马鲁肽,利拉鲁肽,德谷胰岛素,InsulinIcodec胰岛素侧链,发酵索玛/利拉直链热卖
5楼2012-11-06 09:00:45
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hellolin

金虫 (小有名气)

请问楼主,但都都在膜的最上面是指哪个上面
scienceguy
6楼2012-12-27 15:13:00
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chhy2014

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

形成多聚体的原因很多的,疏水作用、二硫键、蛋白质的错误折叠、温度、PH、离子强度等原因。你的蛋白纯度怎么样?我试验时也遇到蛋白形成多聚体的现象,优化DTT的含量后发现可以使聚体条带消除,但是我不确定除了目的条带以外的条带是目的条带聚集形成的,可能是目的蛋白和杂蛋白形成。还有你复性缓冲液选择合适吗?缓冲液的PH值选择合适吗?缓冲液选择(包括缓冲液PH值)不合适可能导致蛋白形成聚体。
7楼2012-12-28 16:09:36
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