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dirtyangle

新虫 (初入文坛)

[求助] 空气中氧化能增加由二硫键形成的二聚体蛋白质的量吗

我现在做的蛋白是个二聚体，现在跑非还原电泳能看到二聚体，但是量不多，想用空气中氧化的办法增加二聚体的量，不知道各位大人们有知道这个方法的吗，有没有相关论文呢？
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1楼2013-08-23 17:03:32
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fuyuandj86

版主 (著名写手)

己所不欲，勿施于人

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gyesang: 金币+2, 鼓励回帖交流！ 2013-08-24 02:09:08
我读过有文章研究蛋白的还原态, 先用DTT把蛋白所有的二硫键断开, 然后过柱子除去过量DTT, 接下来为了保证Cystine不会在没有DTT的情况下重新形成二硫键,就在完全无氧的情况下进行试验.
既然为了防止二硫键重新生成, 需要在完全无氧的条件下操作,想必氧气是可以增加二硫键的
不过谨慎怀疑作用有限. 你如果想用氧气饱和的缓冲液试下也无妨,无非就是先往缓冲液里吹10分钟氧气,搅拌加冒泡.我以前有这么做过,氧气在冷水里的溶解度还是不错的
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The doer of good becomes good, the doer of evil becomes evil.
2楼2013-08-23 22:05:13
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凌波丽

专家顾问 (知名作家)

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★ ★
感谢参与，应助指数 +1
dirtyangle(gyesang代发): 金币+2, 鼓励回帖应助！ 2013-08-24 02:09:18
二硫键会在氧气中形成，有氧催化巯基生成二硫键。所以要防止氧化，一是将反应器皿放入充氮的容器，二是用碘乙酸等封闭巯基，以后再去掉。

二硫键的形成本身就会加快或者一定程度上改变蛋白质的折叠构象或者折叠过程，而不是像过去认为的那样，二硫键形成只是被动的稳定三维构象。
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3楼2013-08-23 23:05:48
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凌波丽

专家顾问 (知名作家)

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dirtyangle(gyesang代发): 金币+3, 鼓励回帖应助！ 2013-08-24 02:09:26
如果操作时间短可以加入放映体系中以Beta-巯基乙醇或DTT，但是时间长了也不行，而且要考虑Beta-巯基乙醇或DTT可能有其他影响，尤其是后期要是用凝胶电泳进行染色的话，Beta-巯基乙醇可能对一些染料会有影响（比如银染有时可能会受到影响），染色前最好用超滤去掉，那时离心机最好在封闭的充氮环境中运行。
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4楼2013-08-23 23:09:55
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