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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 想通过SPDP连接蛋白质和多肽，加入DTT会破坏蛋白质本身的二硫键吗
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woerjianbo

木虫 (小有名气)

[求助] 想通过SPDP连接蛋白质和多肽，加入DTT会破坏蛋白质本身的二硫键吗

有没有方法可以避免
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1楼 2013-02-26 21:02:03
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回帖支持 ( 显示支持度最高的前 50 名 )

一步一步

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
wizardfan: 金币+3, 谢谢分享经验 2013-03-02 09:16:23
SPDP实际上一般用于酶和蛋白之间的偶联，首先与两者之中的一个的伯氨基反应。之后将另外一个巯基化，然后将SPDP活化的物质用还原剂（如TCEP）还原出巯基，再与巯基化的另外一个物质反应，生成二硫键。这样就得到了偶联物。
蛋白和多肽的偶联你可以不用这种偶联剂。建议选用MBS或者SMCC或者Sulfo-SMCC。这样只需要多肽末端含有巯基就可以。当然如果多肽上不含有巯基，你可以在合成多肽的时候自己在末端添加。或者是根据多肽序列上含有的伯氨基或者羧基个数，来选用其他的偶联方法，如EDC或者GA法。
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8楼2013-03-01 12:43:37
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普通回帖

xiaoqi5992

银虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
DTT肯定能破坏二硫键
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2楼2013-02-27 08:40:44
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woerjianbo

木虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by xiaoqi5992 at 2013-02-27 08:40:44
DTT肯定能破坏二硫键

那SPDP不适用于带二硫键的蛋白质修饰吗
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3楼2013-02-27 09:37:25
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xiaoqi5992

银虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★
wizardfan: 金币+2, 谢谢参与 2013-02-28 05:37:42
引用回帖:
3楼: Originally posted by woerjianbo at 2013-02-27 09:37:25
那SPDP不适用于带二硫键的蛋白质修饰吗...

SPDP我没有用过，“SPDP，一种异-双官能试剂，用于结合两种不同的蛋白质，诸如酶和抗体。SPDP首先经由其氨基与一个蛋白质分子反应。SPDP向该蛋白质中引入吡啶二硫基，接着该吡啶二硫基由DTT还原形成硫醇基。这些硫醇基接着与另一蛋白质分子形成二硫键，从而产生异二聚物蛋白质”这是在百度百科查到的。
DTT经常用来打开蛋白质的二硫键，像做变性PAGE等都用到了DTT。
你这个SPDP修饰的问题还得请教高人啊。
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4楼2013-02-27 11:02:10
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woerjianbo

木虫 (小有名气)
引用回帖:
4楼: Originally posted by xiaoqi5992 at 2013-02-27 11:02:10
SPDP我没有用过，“SPDP，一种异-双官能试剂，用于结合两种不同的蛋白质，诸如酶和抗体。SPDP首先经由其氨基与一个蛋白质分子反应。SPDP向该蛋白质中引入吡啶二硫基，接着该吡啶二硫基由DTT还原形成硫醇基。这些硫 ...

嗯，谢谢了
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5楼2013-02-27 11:11:31
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prank

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
wizardfan: 金币+2, 谢谢分享经验 2013-03-01 05:18:27
氨基变巯基可以用这个试剂 2-iminothiolane
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6楼2013-02-28 08:26:30
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woerjianbo

木虫 (小有名气)
引用回帖:
6楼: Originally posted by prank at 2013-02-28 08:26:30
氨基变巯基可以用这个试剂 2-iminothiolane

这种试剂有没有过程比较详细的文献，谢谢了
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7楼2013-02-28 08:58:37
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woerjianbo

木虫 (小有名气)
引用回帖:
8楼: Originally posted by 一步一步 at 2013-03-01 12:43:37
SPDP实际上一般用于酶和蛋白之间的偶联，首先与两者之中的一个的伯氨基反应。之后将另外一个巯基化，然后将SPDP活化的物质用还原剂（如TCEP）还原出巯基，再与巯基化的另外一个物质反应，生成二硫键。这样就得到了偶 ...

要是直接用SPDP修饰蛋白质后，利用巯基--二硫键的交换，直接与带巯基的多肽反应，反应效率怎么样
这几种偶联剂有什么区别，优缺点分别都是什么呢
实验发现在BSA的氨基上的反应效率很低，是怎么回事呢
谢谢了O(∩_∩)O~
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9楼2013-03-01 16:05:47
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一步一步

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
woerjianbo: 金币+10, ★★★很有帮助 2013-03-01 18:54:49
引用回帖:
9楼: Originally posted by woerjianbo at 2013-03-01 16:05:47
要是直接用SPDP修饰蛋白质后，利用巯基--二硫键的交换，直接与带巯基的多肽反应，反应效率怎么样
这几种偶联剂有什么区别，优缺点分别都是什么呢
实验发现在BSA的氨基上的反应效率很低，是怎么回事呢
谢谢了O(∩ ...

至于你说的反应效率这个我不是很清楚，因为我没用这个偶联剂做过，个人不建议用这个试剂，因为反应步骤和添加的试剂较多，还是建议使用我推荐的试剂。
至于区别你还是自己查查吧，网上很多的。
你提到的BSA上的氨基反应率很低，你的反应条件有问题啊？像与载体蛋白的氨基反应的反应率感觉还是蛮高的。
说实话，你既然有这个偶联剂，那就必然有该试剂的说明书，建议你认真研究下你的说明书吧。
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10楼2013-03-01 16:17:18
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