24小时热门版块排行榜    

北京石油化工学院2026年研究生招生接收调剂公告
查看: 4309  |  回复: 15

zk0604

木虫 (正式写手)

[求助] 非还原性SDS-PAGE验证二硫键存在分析,请高人指点

为了验证我的蛋白通过二硫键形成了二聚体,我取同一管蛋白分别加入含DDT的loading buffer 和 不含DDT的loading buffer中煮沸处理再跑SDS-PAGE。结果如图,无DDT处理组在大分子量处出现了一条带,可以认为是二聚体,但在最下面又出现一条小带不知道该怎么理解(如红箭头所示)。如果是降解的话左边的对照组应该也会有。大家能不能帮忙分析一下,不胜感激!!!
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关商家推荐: (我也要在这里推广)

» 本主题相关价值贴推荐,对您同样有帮助:

已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

dshlove

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
zk0604: 金币+1 2012-06-29 14:31:56
amisking: 金币+2, 鼓励发帖帮助解答问题。 2012-06-29 18:24:00
你这是非变性胶么?SDS不是会破坏多聚体么,跑出来的应该都是单体啊。还有,很多二聚体并不一定是以二硫键形式形成的,所以,你就算知道是二聚体,你也不能肯定是有二硫键啊。
2楼2012-06-29 13:43:38
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

zk0604

木虫 (正式写手)

引用回帖:
2楼: Originally posted by dshlove at 2012-06-29 13:43:38
你这是非变性胶么?SDS不是会破坏多聚体么,跑出来的应该都是单体啊。还有,很多二聚体并不一定是以二硫键形式形成的,所以,你就算知道是二聚体,你也不能肯定是有二硫键啊。

这是变性胶,不是native page. 那两个孔道所用的loading buffer中都有SDS,只有一个区别那就是右边的没加还原剂DDT,从结果上看应该可以认为是二硫键在起作用吧?
3楼2012-06-29 14:31:15
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

dshlove

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

引用回帖:
3楼: Originally posted by zk0604 at 2012-06-29 14:31:15
这是变性胶,不是native page. 那两个孔道所用的loading buffer中都有SDS,只有一个区别那就是右边的没加还原剂DDT,从结果上看应该可以认为是二硫键在起作用吧?...

说SDS不能破坏,但是DTT能还原,说实话二硫键有这特性,其他的我想不到了。但是你这胶跑的也,marker怎么能跑成这样,甘氨酸缓冲液好久没换了?
4楼2012-06-29 14:36:10
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

zk0604

木虫 (正式写手)

引用回帖:
4楼: Originally posted by dshlove at 2012-06-29 14:36:10
说SDS不能破坏,但是DTT能还原,说实话二硫键有这特性,其他的我想不到了。但是你这胶跑的也,marker怎么能跑成这样,甘氨酸缓冲液好久没换了?...

负极液用了几次的,不过放文章上应该没有什么影响。只是没有办法解释多出的一条带啊
5楼2012-06-29 15:18:50
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

dshlove

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

引用回帖:
5楼: Originally posted by zk0604 at 2012-06-29 15:18:50
负极液用了几次的,不过放文章上应该没有什么影响。只是没有办法解释多出的一条带啊...

重跑试试?有时候也是胶的问题
6楼2012-06-29 15:24:55
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

fallmonkey

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
zk0604: 金币+5, 有帮助 2012-06-29 21:10:43
zk0604: 金币+10, ★★★很有帮助 2012-07-01 11:46:56
你不加ddt的下面两条带很可能是形成二硫键的两个亚基从其他位置断开了,形成了一个大一些、一个小一些的单体。建议考察一下你蛋白里面一级结构里面,序列有没有温度敏感的序列(猜测)。
7楼2012-06-29 18:19:12
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

flyy1986

铜虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
zk0604: 金币+5, ★★★很有帮助 2012-06-30 10:21:18
小丹木木: 金币+2, 鼓励应助 2012-07-11 13:35:57
建议重新来过一次以保证实验的准确度。这里提出我的经验和推测。如果蛋白质分子内存在二硫键和蛋白质分子内无二硫键的电泳迁移率存在差异。虽然差异不大,但可以肉眼可分辨了。这种解释用来监控蛋白质折叠,貌似也可以符合你的实验结果。无DTT样品中存在可能至少三种二硫键状况的分子。不过建议重来。

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
8楼2012-06-30 08:07:10
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

zk0604

木虫 (正式写手)

引用回帖:
8楼: Originally posted by flyy1986 at 2012-06-30 08:07:10
建议重新来过一次以保证实验的准确度。这里提出我的经验和推测。如果蛋白质分子内存在二硫键和蛋白质分子内无二硫键的电泳迁移率存在差异。虽然差异不大,但可以肉眼可分辨了。这种解释用来监控蛋白质折叠,貌似也可 ...

谢谢,之前我有重复过,但那边还是会多出一条带的。。
9楼2012-06-30 10:20:59
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

zk0604

木虫 (正式写手)

引用回帖:
8楼: Originally posted by flyy1986 at 2012-06-30 08:07:10
建议重新来过一次以保证实验的准确度。这里提出我的经验和推测。如果蛋白质分子内存在二硫键和蛋白质分子内无二硫键的电泳迁移率存在差异。虽然差异不大,但可以肉眼可分辨了。这种解释用来监控蛋白质折叠,貌似也可 ...

我没有把无二硫键的野生蛋白图弄出来,那个跑胶只有一条带,而且与存在二硫键的蛋白质分子加DDT煮沸跑胶的电泳迁移一致。我估计只能用结构差异来解释了
10楼2012-06-30 10:25:27
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 zk0604 的主题更新
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 一志愿北京化工085600 310分求调剂 +16 0856材料与化工3 2026-04-04 18/900 2026-04-06 01:54 by BruceLiu320
[有机交流] 3-溴吡啶-4-甲醛合成 10+3 雪糕也能爆炸 2026-03-31 9/450 2026-04-06 00:24 by nBu锂
[考研] 复试调剂 +13 呼呼?~+123456 2026-04-05 13/650 2026-04-05 22:07 by 醉翁wl
[考研] 080200学硕,机械工程专业277分,求带走! +7 瓶子PZ 2026-03-31 7/350 2026-04-05 17:49 by liucky
[考研] 0860 求调剂 一志愿国科大 348 分 +3 WiiiP 2026-04-03 3/150 2026-04-05 17:43 by Ecowxq666!
[考研] 270分求调剂 +4 maxjxbsk 2026-04-01 4/200 2026-04-05 17:04 by yulian1987
[考研] 313求调剂 +5 海日海日 2026-04-04 5/250 2026-04-05 15:52 by jndximd
[考研] 313求调剂 +5 海日海日 2026-04-04 7/350 2026-04-05 13:58 by imissbao
[考研] 085600调剂 +9 东照照照 2026-04-04 9/450 2026-04-05 13:44 by ujn_zhuj
[考研] 285求调剂 +11 哦呦呼o 2026-04-04 11/550 2026-04-05 08:15 by 544594351
[考研] 一志愿北京科技大学材料工程085601,求调剂 +17 cdyw 2026-04-02 18/900 2026-04-04 11:14 by w_xuqing
[考研] 335求调剂 +7 沈清璃 2026-04-03 7/350 2026-04-03 18:55 by lijunpoly
[考研] 材料专硕322分 +13 哈哈哈吼吼吼哈 2026-04-01 13/650 2026-04-03 16:08 by 哦哦123
[考研] 0703化学 +7 goldtt 2026-04-02 9/450 2026-04-03 09:36 by 蓝云思雨
[考研] 321求调剂 一志愿 浙江工业大学生物医药 +5 嘿嘿HC 2026-04-01 6/300 2026-04-02 15:23 by sophie2180
[考研] 271求调剂 +15 勒布朗@ 2026-03-31 20/1000 2026-04-02 11:24 by Sammy2
[考研] 求调剂,一志愿南京师范大学计算机专硕,初试373,六级通过, +3 计算机追梦人 2026-04-01 3/150 2026-04-02 07:57 by fxue1114
[考研] 296求调剂 +4 汪!?! 2026-03-31 7/350 2026-04-01 22:04 by 客尔美德
[考研] 调剂申请 +8 张张张张zy 2026-03-31 9/450 2026-04-01 08:29 by zjbkx
[考研] 一志愿食品科学与工程083200求调剂 +4 XQTJZ 2026-03-30 4/200 2026-03-31 04:10 by fmesaito
信息提示
请填处理意见