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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 非还原性SDS-PAGE验证二硫键存在分析，请高人指点
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zk0604

木虫 (正式写手)

[求助] 非还原性SDS-PAGE验证二硫键存在分析，请高人指点

为了验证我的蛋白通过二硫键形成了二聚体，我取同一管蛋白分别加入含DDT的loading buffer 和 不含DDT的loading buffer中煮沸处理再跑SDS-PAGE。结果如图，无DDT处理组在大分子量处出现了一条带，可以认为是二聚体，但在最下面又出现一条小带不知道该怎么理解（如红箭头所示）。如果是降解的话左边的对照组应该也会有。大家能不能帮忙分析一下，不胜感激！！！
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1楼 2012-06-29 09:56:32
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fallmonkey

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
zk0604: 金币+5, ★有帮助 2012-06-29 21:10:43
zk0604: 金币+10, ★★★很有帮助 2012-07-01 11:46:56
你不加ddt的下面两条带很可能是形成二硫键的两个亚基从其他位置断开了，形成了一个大一些、一个小一些的单体。建议考察一下你蛋白里面一级结构里面，序列有没有温度敏感的序列（猜测）。
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7楼2012-06-29 18:19:12
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dshlove

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
zk0604: 金币+1 2012-06-29 14:31:56
amisking: 金币+2, 鼓励发帖帮助解答问题。 2012-06-29 18:24:00
你这是非变性胶么？SDS不是会破坏多聚体么，跑出来的应该都是单体啊。还有，很多二聚体并不一定是以二硫键形式形成的，所以，你就算知道是二聚体，你也不能肯定是有二硫键啊。
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2楼2012-06-29 13:43:38
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zk0604

木虫 (正式写手)
引用回帖:
2楼: Originally posted by dshlove at 2012-06-29 13:43:38
你这是非变性胶么？SDS不是会破坏多聚体么，跑出来的应该都是单体啊。还有，很多二聚体并不一定是以二硫键形式形成的，所以，你就算知道是二聚体，你也不能肯定是有二硫键啊。

这是变性胶，不是native page. 那两个孔道所用的loading buffer中都有SDS，只有一个区别那就是右边的没加还原剂DDT，从结果上看应该可以认为是二硫键在起作用吧？
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3楼2012-06-29 14:31:15
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dshlove

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

引用回帖:
3楼: Originally posted by zk0604 at 2012-06-29 14:31:15
这是变性胶，不是native page. 那两个孔道所用的loading buffer中都有SDS，只有一个区别那就是右边的没加还原剂DDT，从结果上看应该可以认为是二硫键在起作用吧？...

说SDS不能破坏，但是DTT能还原，说实话二硫键有这特性，其他的我想不到了。但是你这胶跑的也，marker怎么能跑成这样，甘氨酸缓冲液好久没换了？
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4楼2012-06-29 14:36:10
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