24小时热门版块排行榜    

查看: 4266  |  回复: 15
当前只显示满足指定条件的回帖,点击这里查看本话题的所有回帖

zk0604

木虫 (正式写手)

[求助] 非还原性SDS-PAGE验证二硫键存在分析,请高人指点

为了验证我的蛋白通过二硫键形成了二聚体,我取同一管蛋白分别加入含DDT的loading buffer 和 不含DDT的loading buffer中煮沸处理再跑SDS-PAGE。结果如图,无DDT处理组在大分子量处出现了一条带,可以认为是二聚体,但在最下面又出现一条小带不知道该怎么理解(如红箭头所示)。如果是降解的话左边的对照组应该也会有。大家能不能帮忙分析一下,不胜感激!!!
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关商家推荐: (我也要在这里推广)

» 本主题相关价值贴推荐,对您同样有帮助:

已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

fallmonkey

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
zk0604: 金币+5, 有帮助 2012-06-29 21:10:43
zk0604: 金币+10, ★★★很有帮助 2012-07-01 11:46:56
你不加ddt的下面两条带很可能是形成二硫键的两个亚基从其他位置断开了,形成了一个大一些、一个小一些的单体。建议考察一下你蛋白里面一级结构里面,序列有没有温度敏感的序列(猜测)。
7楼2012-06-29 18:19:12
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 16 个回答

dshlove

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
zk0604: 金币+1 2012-06-29 14:31:56
amisking: 金币+2, 鼓励发帖帮助解答问题。 2012-06-29 18:24:00
你这是非变性胶么?SDS不是会破坏多聚体么,跑出来的应该都是单体啊。还有,很多二聚体并不一定是以二硫键形式形成的,所以,你就算知道是二聚体,你也不能肯定是有二硫键啊。
2楼2012-06-29 13:43:38
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

zk0604

木虫 (正式写手)

引用回帖:
2楼: Originally posted by dshlove at 2012-06-29 13:43:38
你这是非变性胶么?SDS不是会破坏多聚体么,跑出来的应该都是单体啊。还有,很多二聚体并不一定是以二硫键形式形成的,所以,你就算知道是二聚体,你也不能肯定是有二硫键啊。

这是变性胶,不是native page. 那两个孔道所用的loading buffer中都有SDS,只有一个区别那就是右边的没加还原剂DDT,从结果上看应该可以认为是二硫键在起作用吧?
3楼2012-06-29 14:31:15
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

dshlove

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

引用回帖:
3楼: Originally posted by zk0604 at 2012-06-29 14:31:15
这是变性胶,不是native page. 那两个孔道所用的loading buffer中都有SDS,只有一个区别那就是右边的没加还原剂DDT,从结果上看应该可以认为是二硫键在起作用吧?...

说SDS不能破坏,但是DTT能还原,说实话二硫键有这特性,其他的我想不到了。但是你这胶跑的也,marker怎么能跑成这样,甘氨酸缓冲液好久没换了?
4楼2012-06-29 14:36:10
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 328求调剂,英语六级551,有科研经历 +3 生物工程调剂 2026-03-16 10/500 2026-03-18 20:41 by Wangjingyue
[考研] 一志愿中国海洋大学,生物学,301分,求调剂 +4 1孙悟空 2026-03-17 4/200 2026-03-18 17:59 by fivewind
[考研] 295求调剂 +3 一志愿京区211 2026-03-18 5/250 2026-03-18 17:03 by zhaoqian0518
[考研] 0703化学调剂 ,六级已过,有科研经历 +10 曦熙兮 2026-03-15 10/500 2026-03-18 14:19 by 007_lilei
[考研] 296求调剂 +5 大口吃饭 身体健 2026-03-13 5/250 2026-03-17 21:05 by 不惑可乐
[考研] 268求调剂 +7 好运连绵不绝 2026-03-12 8/400 2026-03-17 20:28 by xilongliang
[考研] 本人考085602 化学工程 专硕 +16 不知道叫什么! 2026-03-15 18/900 2026-03-17 17:05 by ruiyingmiao
[考研] 290求调剂 +3 p asserby. 2026-03-15 4/200 2026-03-17 16:35 by wangkm
[考研] 一志愿南京大学,080500材料科学与工程,调剂 +4 Jy? 2026-03-16 4/200 2026-03-17 11:02 by gaoqiong
[考研] 274求调剂 +5 时间点 2026-03-13 5/250 2026-03-17 07:34 by 热情沙漠
[考研] 333求调剂 +3 文思客 2026-03-16 7/350 2026-03-16 18:21 by 文思客
[考研] 085600材料与化工 求调剂 +13 enenenhui 2026-03-13 14/700 2026-03-16 15:19 by 了了了了。。
[考研] 0856专硕279求调剂 +5 加油加油!? 2026-03-15 5/250 2026-03-15 11:58 by 2020015
[考研] 288求调剂 +4 奇点0314 2026-03-14 4/200 2026-03-14 23:04 by JourneyLucky
[考研] 080500,材料学硕302分求调剂学校 +4 初识可乐 2026-03-14 5/250 2026-03-14 21:08 by peike
[考研] 297求调剂 +4 学海漂泊 2026-03-13 4/200 2026-03-14 11:51 by 热情沙漠
[考研] 304求调剂 +6 Mochaaaa 2026-03-12 7/350 2026-03-13 22:18 by 星空星月
[考研] 26调剂/材料科学与工程/总分295/求收留 +9 2026调剂侠 2026-03-12 9/450 2026-03-13 20:46 by 18595523086
[考研] 材料301分求调剂 +5 Liyouyumairs 2026-03-12 5/250 2026-03-13 14:42 by JourneyLucky
[考研] 070303一志愿西北大学学硕310找调剂 +3 d如愿上岸 2026-03-13 3/150 2026-03-13 10:43 by houyaoxu
信息提示
请填处理意见