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zk0604

木虫 (正式写手)

[求助] 非还原性SDS-PAGE验证二硫键存在分析,请高人指点

为了验证我的蛋白通过二硫键形成了二聚体,我取同一管蛋白分别加入含DDT的loading buffer 和 不含DDT的loading buffer中煮沸处理再跑SDS-PAGE。结果如图,无DDT处理组在大分子量处出现了一条带,可以认为是二聚体,但在最下面又出现一条小带不知道该怎么理解(如红箭头所示)。如果是降解的话左边的对照组应该也会有。大家能不能帮忙分析一下,不胜感激!!!
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dshlove

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

引用回帖:
3楼: Originally posted by zk0604 at 2012-06-29 14:31:15
这是变性胶,不是native page. 那两个孔道所用的loading buffer中都有SDS,只有一个区别那就是右边的没加还原剂DDT,从结果上看应该可以认为是二硫键在起作用吧?...

说SDS不能破坏,但是DTT能还原,说实话二硫键有这特性,其他的我想不到了。但是你这胶跑的也,marker怎么能跑成这样,甘氨酸缓冲液好久没换了?
4楼2012-06-29 14:36:10
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dshlove

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
zk0604: 金币+1 2012-06-29 14:31:56
amisking: 金币+2, 鼓励发帖帮助解答问题。 2012-06-29 18:24:00
你这是非变性胶么?SDS不是会破坏多聚体么,跑出来的应该都是单体啊。还有,很多二聚体并不一定是以二硫键形式形成的,所以,你就算知道是二聚体,你也不能肯定是有二硫键啊。
2楼2012-06-29 13:43:38
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zk0604

木虫 (正式写手)

引用回帖:
2楼: Originally posted by dshlove at 2012-06-29 13:43:38
你这是非变性胶么?SDS不是会破坏多聚体么,跑出来的应该都是单体啊。还有,很多二聚体并不一定是以二硫键形式形成的,所以,你就算知道是二聚体,你也不能肯定是有二硫键啊。

这是变性胶,不是native page. 那两个孔道所用的loading buffer中都有SDS,只有一个区别那就是右边的没加还原剂DDT,从结果上看应该可以认为是二硫键在起作用吧?
3楼2012-06-29 14:31:15
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zk0604

木虫 (正式写手)

引用回帖:
4楼: Originally posted by dshlove at 2012-06-29 14:36:10
说SDS不能破坏,但是DTT能还原,说实话二硫键有这特性,其他的我想不到了。但是你这胶跑的也,marker怎么能跑成这样,甘氨酸缓冲液好久没换了?...

负极液用了几次的,不过放文章上应该没有什么影响。只是没有办法解释多出的一条带啊
5楼2012-06-29 15:18:50
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