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你是我的唯一

银虫 (初入文坛)

[求助] 蛋白表达出现包涵体

在做蛋白表达的时候,结果全是包涵体
1、我的基因序列是经过密码子优化过的,基因序列没有稀有密码子。
2、按照之前文章上面的去做表达,全是包涵体。
3、优化过温度、转速、加葡萄糖、乙醇、甘油还是包涵体。
4、换过表达宿主BL21和Rosetta也全是包涵体。
请教各位大神,还该如何改进,才能减少包涵体?
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Edgel

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
7楼: Originally posted by 小鼹鼠 at 2016-07-15 10:39:48
你好!请问你是怎么做的呢?有没有比较详细的protocol之类?我的蛋白也一直在沉淀里,我想尝试做一下复性。但是我们实验室也没人做过,怕一些细节问题我注意不到。可以分享一下吗?多谢~~...

有一本很大很厚书叫蛋白纯化指南,上面关于蛋白质的各种方法技术都可以查阅到。我当时做包涵体就是得益于它,不过不同的蛋白,其分子量、配体等各方面性质不一样,有些很容易复性,另一些很难复性。我比较幸运,第一次尝试就成功了,我是直接把包涵体溶解在8M的Urea中,然后透析,检测出足够的活性后再进行蛋白纯化。
9楼2016-07-16 21:51:46
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tjw0824

木虫 (著名写手)

表达时间优化一下,诱导时间缩短试一下,或者尝试促溶标签试一下.

发自小木虫Android客户端
tttt
2楼2016-07-12 21:58:41
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普通回帖

a2703521

金虫 (小有名气)

123

这方面的优化表达现在文献应该很多吧,查查就有。
3楼2016-07-13 08:57:21
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18242016312

新虫 (小有名气)

把包涵体纯化出来,再复性

发自小木虫Android客户端
4楼2016-07-13 09:02:14
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sxjcas

禁虫 (知名作家)

本帖内容被屏蔽

5楼2016-07-14 09:43:11
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Edgel

新虫 (初入文坛)

我的蛋白也是这种情况,后来实在没办法了,尝试的包涵体复性。复性效果很好,凭这个结果还得了优秀硕士论文。

发自小木虫Android客户端
6楼2016-07-14 18:07:24
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小鼹鼠

木虫 (小有名气)

引用回帖:
6楼: Originally posted by Edgel at 2016-07-14 18:07:24
我的蛋白也是这种情况,后来实在没办法了,尝试的包涵体复性。复性效果很好,凭这个结果还得了优秀硕士论文。

你好!请问你是怎么做的呢?有没有比较详细的protocol之类?我的蛋白也一直在沉淀里,我想尝试做一下复性。但是我们实验室也没人做过,怕一些细节问题我注意不到。可以分享一下吗?多谢~~
天道酬勤
7楼2016-07-15 10:39:48
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不会悲伤的鱼

新虫 (初入文坛)

尿素变性,skl变性,都是常用方法,不过变性在复性,蛋白结构就可能发生改变了,不知道对你的目的会不会有影响

发自小木虫IOS客户端
8楼2016-07-16 10:17:38
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biosci

捐助贵宾 (职业作家)


10楼2016-07-17 07:55:00
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