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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 蛋白表达中实验组与对照的诱导表达无明显差异，求高人指点。
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weinerchen

新虫 (初入文坛)

[求助] 蛋白表达中实验组与对照的诱导表达无明显差异，求高人指点。

最近的蛋白表达出现了严峻的问题，空载组（无目的片段）、未诱导组（含目的片段）、诱导组（含目的片段）的表达结果竟然无明显差异。在SDS－PAGE时，我分别上样了各组的细胞裂解上清液（可溶性蛋白）和细胞碎片（包涵体），但是结果显示三组结果无明显差异。
附图：
泳道从左到右依次为Marker，1，2，3，4，5，6，7；Marker第四条和第五条分别为72kd和55kd；
1为空载表达；2-4，5-7分别为蛋白1(60kD)，蛋白2（55KD）的表达结果，其中2和5均为两种蛋白表达的未诱导组。

我用的表达载体为pET28a，求高手指点迷津啊。
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1楼 2012-07-23 13:06:05
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reallpf

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
小丹木木: 金币+1, 鼓励交流 2012-07-23 15:52:41
个人认为你的图中的条带差异不大都是你表达宿主的自身蛋白条带。而你要表达的蛋白要么表达量非常小使得你在SDS-PAGE胶上看不出差别，甚至根本没有得到表达。如果能够测酶活或从其它方面来衡量产量就好。跑胶终究只是提供参考。
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2楼2012-07-23 14:23:23
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weinerchen

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by reallpf at 2012-07-23 14:23:23
个人认为你的图中的条带差异不大都是你表达宿主的自身蛋白条带。而你要表达的蛋白要么表达量非常小使得你在SDS-PAGE胶上看不出差别，甚至根本没有得到表达。如果能够测酶活或从其它方面来衡量产量就好。跑胶终究只是 ...

我之前也有这么想过，我的目的蛋白表达后会带有his- tag，后来做了western blot发现无相关his标签蛋白的表达。难道是我转化的宿主出现问题或失误，纠结啊。
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3楼2012-07-24 10:02:30
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