24小时热门版块排行榜    

查看: 1357  |  回复: 2
当前只显示满足指定条件的回帖,点击这里查看本话题的所有回帖

weinerchen

新虫 (初入文坛)

[求助] 蛋白表达中实验组与对照的诱导表达无明显差异,求高人指点。

最近的蛋白表达出现了严峻的问题,空载组(无目的片段)、未诱导组(含目的片段)、诱导组(含目的片段)的表达结果竟然无明显差异。在SDS-PAGE时,我分别上样了各组的细胞裂解上清液(可溶性蛋白)和细胞碎片(包涵体),但是结果显示三组结果无明显差异。
附图:
泳道从左到右依次为Marker,1,2,3,4,5,6,7;Marker第四条和第五条分别为72kd和55kd;
1为空载表达;2-4,5-7分别为蛋白1(60kD),蛋白2(55KD)的表达结果,其中2和5均为两种蛋白表达的未诱导组。

我用的表达载体为pET28a,求高手指点迷津啊。
回复此楼
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

weinerchen

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
2楼: Originally posted by reallpf at 2012-07-23 14:23:23
个人认为你的图中的条带差异不大都是你表达宿主的自身蛋白条带。而你要表达的蛋白要么表达量非常小使得你在SDS-PAGE胶上看不出差别,甚至根本没有得到表达。如果能够测酶活或从其它方面来衡量产量就好。跑胶终究只是 ...

我之前也有这么想过,我的目的蛋白表达后会带有his- tag,后来做了western blot发现无相关his标签蛋白的表达。难道是我转化的宿主出现问题或失误,纠结啊。
3楼2012-07-24 10:02:30
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 3 个回答

reallpf

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★
感谢参与,应助指数 +1
小丹木木: 金币+1, 鼓励交流 2012-07-23 15:52:41
个人认为你的图中的条带差异不大都是你表达宿主的自身蛋白条带。而你要表达的蛋白要么表达量非常小使得你在SDS-PAGE胶上看不出差别,甚至根本没有得到表达。如果能够测酶活或从其它方面来衡量产量就好。跑胶终究只是提供参考。
2楼2012-07-23 14:23:23
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[论文投稿] 售SCI一区T0P文章,我:8.O.55.1.O54,科目全,可伽急 +4 2rKfVQg2jQww 2026-11-06 5/250 2026-11-07 17:34 by Xc2FxHsHkBNc
[硕博家园] 售SCI一区T0P文章,我:8.O55.1.O.54,科目全,可十急 +4 2rKfVQg2jQww 2026-11-06 5/250 2026-11-07 17:23 by Xc2FxHsHkBNc
[教师之家] 售SCI一区T0P文章,我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可+急 +3 5sJFDKp2kwuI 2026-11-06 5/250 2026-11-07 17:01 by Xc2FxHsHkBNc
[考研] 售SCI文章,我:8O.5.5.1O.54,科目全,可十急 +3 5sJFDKp2kwuI 2026-11-06 4/200 2026-11-07 16:50 by Xc2FxHsHkBNc
[公派出国] 售SCI一区文章,我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可伽急 +3 5sJFDKp2kwuI 2026-11-06 5/250 2026-11-07 16:17 by Xc2FxHsHkBNc
[考博] 售SCI文章,我:8O.5.5.1O.54,科目全,可十急 +3 5sJFDKp2kwuI 2026-11-06 5/250 2026-11-07 16:06 by Xc2FxHsHkBNc
[考研] 售SCI一区T0P文章,我:8.O55.1.O.54,科目全,可十急 +4 ELBZ6WwEaRj6 2026-11-05 7/350 2026-11-06 16:43 by 5sJFDKp2kwuI
[考博] 售SCI一区文章,我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可伽急 +6 ELBZ6WwEaRj6 2026-11-04 14/700 2026-11-06 16:32 by 5sJFDKp2kwuI
[考研] 售SCI一区T0P文章,我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可+急 +5 ELBZ6WwEaRj6 2026-11-04 10/500 2026-11-06 16:23 by 5sJFDKp2kwuI
[公派出国] 售SCI一区T0P文章,我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可+急 +5 ttH3f1oA6ace 2026-11-04 10/500 2026-11-06 16:12 by 5sJFDKp2kwuI
[考研] 售SCI一区T0P文章,我:8O.55.1.O.5.4,科目齐全,可+急 +7 ncTVBM6AOJHF 2026-11-04 14/700 2026-11-06 13:47 by BkA9Bi5cMhkD
[硕博家园] 售SCI一区T0P文章,我:8O.55.1.O.54,科目全,可伽急 +8 ncTVBM6AOJHF 2026-11-04 14/700 2026-11-06 13:36 by BkA9Bi5cMhkD
[硕博家园] 售一区SCI文章T0P,我:8O.551.O54,科目全,可十急 +3 ELBZ6WwEaRj6 2026-11-05 5/250 2026-11-06 09:01 by 2lRNluKrJpwL
[考研] 售SCI一区文章,我:8.O.551.O.5.4,科目全,可伽急 +3 ELBZ6WwEaRj6 2026-11-04 10/500 2026-11-06 05:32 by qL1cU46YIdK0
[硕博家园] 售一区SCI文章T0P,我:8O.551.O54,科目全,可十急 +4 ELBZ6WwEaRj6 2026-11-04 8/400 2026-11-06 02:24 by qL1cU46YIdK0
[公派出国] 售SCI-T0P文章,我:8O.5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +3 ELBZ6WwEaRj6 2026-11-04 9/450 2026-11-06 02:15 by qL1cU46YIdK0
[考博] 售一区SCI文章T0P,我:8O.551.O54,科目全,可十急 +4 ttH3f1oA6ace 2026-11-04 7/350 2026-11-06 02:13 by qL1cU46YIdK0
[硕博家园] 售SCI一区T0P文章,我:8.O55.1.O.54,科目全,可十急 +4 hNpp4Y2CGvSC 2026-11-04 12/600 2026-11-06 01:53 by qL1cU46YIdK0
[考博] 售SCI一区T0P文章,我:8.O.55.1.O.5.4,科目全,可+急 +6 ncTVBM6AOJHF 2026-11-04 10/500 2026-11-06 01:51 by qL1cU46YIdK0
[考研] 售一区SCI文章T0P,我:8O.551.O54,科目全,可十急 +5 ncTVBM6AOJHF 2026-11-04 12/600 2026-11-06 01:42 by qL1cU46YIdK0
信息提示
请填处理意见