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weinerchen

新虫 (初入文坛)

[求助] 蛋白表达中实验组与对照的诱导表达无明显差异,求高人指点。

最近的蛋白表达出现了严峻的问题,空载组(无目的片段)、未诱导组(含目的片段)、诱导组(含目的片段)的表达结果竟然无明显差异。在SDS-PAGE时,我分别上样了各组的细胞裂解上清液(可溶性蛋白)和细胞碎片(包涵体),但是结果显示三组结果无明显差异。
附图:
泳道从左到右依次为Marker,1,2,3,4,5,6,7;Marker第四条和第五条分别为72kd和55kd;
1为空载表达;2-4,5-7分别为蛋白1(60kD),蛋白2(55KD)的表达结果,其中2和5均为两种蛋白表达的未诱导组。

我用的表达载体为pET28a,求高手指点迷津啊。
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weinerchen

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
2楼: Originally posted by reallpf at 2012-07-23 14:23:23
个人认为你的图中的条带差异不大都是你表达宿主的自身蛋白条带。而你要表达的蛋白要么表达量非常小使得你在SDS-PAGE胶上看不出差别,甚至根本没有得到表达。如果能够测酶活或从其它方面来衡量产量就好。跑胶终究只是 ...

我之前也有这么想过,我的目的蛋白表达后会带有his- tag,后来做了western blot发现无相关his标签蛋白的表达。难道是我转化的宿主出现问题或失误,纠结啊。
3楼2012-07-24 10:02:30
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reallpf

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖


感谢参与,应助指数 +1
小丹木木: 金币+1, 鼓励交流 2012-07-23 15:52:41
个人认为你的图中的条带差异不大都是你表达宿主的自身蛋白条带。而你要表达的蛋白要么表达量非常小使得你在SDS-PAGE胶上看不出差别,甚至根本没有得到表达。如果能够测酶活或从其它方面来衡量产量就好。跑胶终究只是提供参考。
2楼2012-07-23 14:23:23
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