构建过表达载体，基因CDS大片段缺失
大家好，我最近想构建一个基因的过表达载体。从CDS中PCR该基因（3100bp)，条带单一，大小正确，回收的基因片段测通，序列正确。但是我用同源重组的方式，将基因片段连接到慢病毒载体上，转化后酶切验证，发现插入片段只有1000bp左右，测序也发现中间有2000多bp 的缺失。后面想到可能发生了细菌重组，从原来的DH5a感受态改为用Stbl3和Stable感受态，但是酶切结果显示插入片段还是只有不到1000bp。后来直接把胶回的基因片段连到T载体上，用Stbl3和Stable感受态转化，依然发现插入片段大范围缺失。
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你查查你的基因里有没有这个酶切位点
我也遇到过类似的事情，当时我们做的是APOE基因，PCR结果很好，插入片段均有缺失（缺失的位置有几种，且可重复）。这个我们最后只能通过密码子优化用大量同义突变进行替换，最终完成克隆。so，也推荐你这么试试。你玩的是哪个苦逼的基因埃�
酶切回收过程中，电泳时你的插入片段大小对应的上吗？是1000bp还是3000bp？