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求助帖:质粒提取摇菌失败求助

作者 Sily2020
来源: 小木虫 750 15 举报帖子
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新手第一次做质粒转化,挑菌、提取,做的是PNL-4-3这个质粒,转化使用热激法,质粒+感受态细胞stbl3结合冰浴30min,热激90s,在冰浴2min,加1ml的无抗LB培养基,摇1h,取10ml菌液铺固体培养基,虽然长菌挺密,但可挑出单菌落,然后10ml有抗培养基摇菌,摇了20管,过夜摇菌,浑浊了,然后用天根大抽提试剂盒,富集了将近200ml的菌体,严格按照说明书做,但最后提取出的质粒浓度不到50ng/ul,纯度OD260/280大于2,为什么呢?希望各位虫友解答一下,感谢

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  • 精华评论
  • Sily2020

    引用回帖:
    9楼: Originally posted by wshdhr8 at 2021-01-23 18:33:22
    挑斑可以直接加到锥形瓶里摇培,过夜能摇浑。你说的先用试管活化一下,试管太细,加的LB不宜太多,2-3-4毫升这个水平,白天摇几个小时微浑,然后1:500   1:1000加到锥形瓶里过夜都行,只要方法对了,都能做出来。 ...

    那摇菌的时候用拿封口膜或保鲜膜把试管或锥形瓶的口封上吗

  • jurkat.1640

    Stbl3是用来表达的,不是用来扩增质粒的,质粒拷贝应该不多;另外你的质粒是不是高拷贝质粒?再加上提质粒操作问题就这样。

  • Lotus清酒

    有可能压根就没摇出来……

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