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Sily2020新虫 (小有名气)
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求助帖：质粒提取摇菌失败求助 已有1人参与
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新手第一次做质粒转化，挑菌、提取，做的是PNL-4-3这个质粒，转化使用热激法，质粒+感受态细胞stbl3结合冰浴30min,热激90s，在冰浴2min，加1ml的无抗LB培养基，摇1h，取10ml菌液铺固体培养基，虽然长菌挺密，但可挑出单菌落，然后10ml有抗培养基摇菌，摇了20管，过夜摇菌，浑浊了，然后用天根大抽提试剂盒，富集了将近200ml的菌体，严格按照说明书做，但最后提取出的质粒浓度不到50ng/ul，纯度OD260/280大于2，为什么呢？希望各位虫友解答一下，感谢     发自小木虫Android客户端 |
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3楼2021-01-22 13:07:47
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10楼2021-01-23 18:35:08
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2楼2021-01-22 11:29:26
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8楼2021-01-23 15:19:00
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挑斑可以直接加到锥形瓶里摇培，过夜能摇浑。你说的先用试管活化一下，试管太细，加的LB不宜太多，2-3-4毫升这个水平，白天摇几个小时微浑，然后1：500 1：1000加到锥形瓶里过夜都行，只要方法对了，都能做出来。 发自小木虫Android客户端 |
9楼2021-01-23 18:33:22
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