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Sily2020新虫 (小有名气)
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求助帖:质粒提取摇菌失败求助 已有1人参与
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新手第一次做质粒转化,挑菌、提取,做的是PNL-4-3这个质粒,转化使用热激法,质粒+感受态细胞stbl3结合冰浴30min,热激90s,在冰浴2min,加1ml的无抗LB培养基,摇1h,取10ml菌液铺固体培养基,虽然长菌挺密,但可挑出单菌落,然后10ml有抗培养基摇菌,摇了20管,过夜摇菌,浑浊了,然后用天根大抽提试剂盒,富集了将近200ml的菌体,严格按照说明书做,但最后提取出的质粒浓度不到50ng/ul,纯度OD260/280大于2,为什么呢?希望各位虫友解答一下,感谢 发自小木虫Android客户端 |
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3楼2021-01-22 13:07:47
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10楼2021-01-23 18:35:08
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2楼2021-01-22 11:29:26
snoopyzxx
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4楼2021-01-22 13:08:51
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7楼2021-01-23 15:15:59
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8楼2021-01-23 15:19:00
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挑斑可以直接加到锥形瓶里摇培,过夜能摇浑。你说的先用试管活化一下,试管太细,加的LB不宜太多,2-3-4毫升这个水平,白天摇几个小时微浑,然后1:500 1:1000加到锥形瓶里过夜都行,只要方法对了,都能做出来。 发自小木虫Android客户端 |
9楼2021-01-23 18:33:22











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