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Sily2020

新虫 (小有名气)

[求助] 求助帖:质粒提取摇菌失败求助已有1人参与

新手第一次做质粒转化,挑菌、提取,做的是PNL-4-3这个质粒,转化使用热激法,质粒+感受态细胞stbl3结合冰浴30min,热激90s,在冰浴2min,加1ml的无抗LB培养基,摇1h,取10ml菌液铺固体培养基,虽然长菌挺密,但可挑出单菌落,然后10ml有抗培养基摇菌,摇了20管,过夜摇菌,浑浊了,然后用天根大抽提试剂盒,富集了将近200ml的菌体,严格按照说明书做,但最后提取出的质粒浓度不到50ng/ul,纯度OD260/280大于2,为什么呢?希望各位虫友解答一下,感谢

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爱吃排骨199

铁虫 (小有名气)

同意某楼,1mL LB复苏培养后离心弃900微升,剩余的重悬菌体沉淀涂板,你的为什么是10mL
5楼2021-01-22 14:50:32
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