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南方科技大学公共卫生及应急管理学院2025级博士研究生招生报考通知
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Sily2020

新虫 (小有名气)

[求助] 求助帖:质粒提取摇菌失败求助已有1人参与

新手第一次做质粒转化,挑菌、提取,做的是PNL-4-3这个质粒,转化使用热激法,质粒+感受态细胞stbl3结合冰浴30min,热激90s,在冰浴2min,加1ml的无抗LB培养基,摇1h,取10ml菌液铺固体培养基,虽然长菌挺密,但可挑出单菌落,然后10ml有抗培养基摇菌,摇了20管,过夜摇菌,浑浊了,然后用天根大抽提试剂盒,富集了将近200ml的菌体,严格按照说明书做,但最后提取出的质粒浓度不到50ng/ul,纯度OD260/280大于2,为什么呢?希望各位虫友解答一下,感谢

求助帖:质粒提取摇菌失败求助


求助帖:质粒提取摇菌失败求助-1


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Sily2020

新虫 (小有名气)

引用回帖:
4楼: Originally posted by snoopyzxx at 2021-01-22 13:08:51
还有涂平板,如果是质粒转化,涂100-200微升菌夜就够了。你10毫升怎么涂的?

说错了,我用的是10ul涂板的,之前用的是100-200但每次都长满培养皿了

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7楼2021-01-23 15:15:59
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查看全部 16 个回答

wshdhr8

铁虫 (小有名气)

菌液摇的不够浑,试管摇不开,用锥形瓶

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2楼2021-01-22 11:29:26
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snoopyzxx

木虫 (著名写手)

挑克隆后先用5毫升摇菌,保种一毫升。剩下的四毫升提取质粒电泳鉴定。不要一来就大抽。小的证明没问题再大抽。

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3楼2021-01-22 13:07:47
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snoopyzxx

木虫 (著名写手)

还有涂平板,如果是质粒转化,涂100-200微升菌夜就够了。你10毫升怎么涂的?

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生物资源交流QQ群:1044518333
4楼2021-01-22 13:08:51
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