一种热稳定性高的酶,热保温后酶活力提高现象正常吗?
各位老师好,
我现在在做一种淀粉酶,在测热稳定性时,发现这种酶在室温放置1 h、50℃、60℃和70℃保温1 h或更长时间,然后在70℃温度下(最适反应温度)测酶活发现保温后的酶都比常温下放置酶的酶活高,并且保温时间越长,酶活力呈现升高趋势,酶活可提高200%以上。请问这种淀粉酶的酶活力变化现象是正常的吗,是否有类似的很多酶都是这种现象?大部分酶的活力我发现都是随着保温时间延长,活力下降的。
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酶是从冷冻的母液里解冻的还是干粉配的?如果是干粉的话可能是因为没有完全溶解。
(1)有没有可能酶里面有抑制剂,但是加热能让抑制剂灭活?
(2)酶里面有水解酶,加热让水解酶失活?
(3)酶原在加热后转变成有活性的酶?
谢谢您的回复,我的酶是异源表达后纯化得到的纯酶液,是液态的
谢谢老师您的回复,我的酶是异源表达后纯化得到的纯酶液,缓冲体系是Tris-HCl,应该是没有抑制剂的。有可能是加热后酶的活力被激活,我想知道这种加热保温后能够被激活的现象是一种常见的现象吗?
不常见。一般而言,加热会让蛋白酶失活。即使是耐热的酶,加热后有部分蛋白失活,活性变低。(高温下,分子运动加剧,导致部分蛋白变性)
加热后,活性更高,不是活力被激活,活性更高(hyperactive)可能更确切一些。和这个类似的例子有,热启动Taq酶,加热后,修饰或抗体失活,有活性的酶释放出来,表现就是加热酶的活性出来了
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