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酶切效率低，求助

NEB的BpuEI酶，1ul酶切不开1ug的质粒，多加酶也没用，求大神指导返回小木虫查看更多

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smyoung

看看温度对不对
sunny0810

可以增加一下酶切时间试试，NEB的内切酶建议的酶切时间是37°C，30 min，但我们往往会选择酶切1h，如果实在很难切开的话，可以延长至4 h或过夜
yuanhuishuai

引用回帖:
2楼: Originally posted by smyoung at 2020-10-29 18:13:58
看看温度对不对

37℃没问题
yuanhuishuai

引用回帖:
4楼: Originally posted by junjieshao at 2020-11-05 00:43:18
质粒质量如何，是midi的？

A260/A280,A260/A230两个比值正常，难道是残留杂质影响
yuanhuishuai

引用回帖:
3楼: Originally posted by sunny0810 at 2020-11-03 21:59:36
可以增加一下酶切时间试试，NEB的内切酶建议的酶切时间是37°C，30 min，但我们往往会选择酶切1h，如果实在很难切开的话，可以延长至4 h或过夜

谢谢，都已试效果一般
，
agricultural

会不会是酶切位点不对，如何判断酶没有切开质粒的呢

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