当前位置: 首页 > 分子生物 >蓝白斑筛选,分离pGBT9和pGADT7

蓝白斑筛选,分离pGBT9和pGADT7

作者 安徒生九日
来源: 小木虫 150 3 举报帖子
+关注

各位大佬,最近我在做酵母双杂,要从酵母中提取阳性的质粒并分离,主要包含了pGADT7和pGBT9两种,由于酵母没有质粒的不相容性,直接提取会得到两种质粒的混合物,而两种质粒又都是amp抗性,也无法用抗生素分离

如图,pGBT9含有这两个domain,但是不含lacI以及lac repressor,而pGADT7载体不含lac相关基因序列,是否可以利用这个差异来筛选?转入pGBT9的在含有x gal的LB(amp抗性)平板上呈现蓝色菌落,转入pGADT7的为白色菌落,且不需要IPTG的诱导。

PS:我们实验是一直在使用贵公司的trelief 5α感受态做转化,应该跟DH5α没什么太大差异。
望解答,谢谢

蓝白斑筛选,分离pGBT9和pGADT7
微信图片_20201021222450.png 返回小木虫查看更多

今日热帖
  • 精华评论
  • 安徒生九日

    贵公司是擎科,给公司发了个邮件忘记改过来了...

  • 畏畏缩缩

    用缺trp的sd培养基摇两天再提质粒试试

  • zhz0809

    你图上标记的不是蓝白斑基因;要看是否有lacZ基因,你的是lacZ操纵子;
    pGBT9和pGADT7质粒大小不一样 5000 和8000bp,可以通过电泳大小区分;电泳分开,分别胶回收转感受态后鉴定试下,

猜你喜欢