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安徒生九日

新虫 (初入文坛)

[交流] 蓝白斑筛选,分离pGBT9和pGADT7

各位大佬,最近我在做酵母双杂,要从酵母中提取阳性的质粒并分离,主要包含了pGADT7和pGBT9两种,由于酵母没有质粒的不相容性,直接提取会得到两种质粒的混合物,而两种质粒又都是amp抗性,也无法用抗生素分离

如图,pGBT9含有这两个domain,但是不含lacI以及lac repressor,而pGADT7载体不含lac相关基因序列,是否可以利用这个差异来筛选?转入pGBT9的在含有x gal的LB(amp抗性)平板上呈现蓝色菌落,转入pGADT7的为白色菌落,且不需要IPTG的诱导。

PS:我们实验是一直在使用贵公司的trelief 5α感受态做转化,应该跟DH5α没什么太大差异。
望解答,谢谢

蓝白斑筛选,分离pGBT9和pGADT7
微信图片_20201021222450.png
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安徒生九日

新虫 (初入文坛)

贵公司是擎科,给公司发了个邮件忘记改过来了...
2楼2020-10-21 22:30:55
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畏畏缩缩

新虫 (初入文坛)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
用缺trp的sd培养基摇两天再提质粒试试

发自小木虫Android客户端
3楼2020-10-23 13:42:48
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zhz0809

新虫 (初入文坛)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
你图上标记的不是蓝白斑基因;要看是否有lacZ基因,你的是lacZ操纵子;
pGBT9和pGADT7质粒大小不一样 5000 和8000bp,可以通过电泳大小区分;电泳分开,分别胶回收转感受态后鉴定试下
4楼2021-01-08 16:40:28
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