24小时热门版块排行榜    

查看: 1174  |  回复: 3
【有奖交流】积极回复本帖子,参与交流,就有机会分得作者 安徒生九日 的 10 个金币
当前只显示满足指定条件的回帖,点击这里查看本话题的所有回帖

安徒生九日

新虫 (初入文坛)

[交流] 蓝白斑筛选,分离pGBT9和pGADT7

各位大佬,最近我在做酵母双杂,要从酵母中提取阳性的质粒并分离,主要包含了pGADT7和pGBT9两种,由于酵母没有质粒的不相容性,直接提取会得到两种质粒的混合物,而两种质粒又都是amp抗性,也无法用抗生素分离

如图,pGBT9含有这两个domain,但是不含lacI以及lac repressor,而pGADT7载体不含lac相关基因序列,是否可以利用这个差异来筛选?转入pGBT9的在含有x gal的LB(amp抗性)平板上呈现蓝色菌落,转入pGADT7的为白色菌落,且不需要IPTG的诱导。

PS:我们实验是一直在使用贵公司的trelief 5α感受态做转化,应该跟DH5α没什么太大差异。
望解答,谢谢

蓝白斑筛选,分离pGBT9和pGADT7
微信图片_20201021222450.png
回复此楼

» 猜你喜欢

已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

畏畏缩缩

新虫 (初入文坛)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
用缺trp的sd培养基摇两天再提质粒试试

发自小木虫Android客户端
3楼2020-10-23 13:42:48
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 4 个回答

安徒生九日

新虫 (初入文坛)

贵公司是擎科,给公司发了个邮件忘记改过来了...
2楼2020-10-21 22:30:55
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

zhz0809

新虫 (初入文坛)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
你图上标记的不是蓝白斑基因;要看是否有lacZ基因,你的是lacZ操纵子;
pGBT9和pGADT7质粒大小不一样 5000 和8000bp,可以通过电泳大小区分;电泳分开,分别胶回收转感受态后鉴定试下
4楼2021-01-08 16:40:28
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[教师之家] 难上的课安排给我,杂事安排给我。评优时我就没份儿了,即便我做得不比绝大多数人差 +3 河西夜郎 2024-06-08 3/150 2024-06-08 10:58 by zhangysbad
[基金申请] 等待会评 等待公示 +8 夏天的Tiffany 2024-06-06 10/500 2024-06-08 10:32 by Pickfoot
[基金申请] 年年想打听,年年打听不到。。 +20 hdzw9071 2024-06-03 28/1400 2024-06-08 09:52 by 潇湘之迷
[基金申请] 河北省基金 +6 星辰32 2024-06-04 9/450 2024-06-08 09:17 by 晓晓爱翠翠
[基金申请] F口的人才项目上会通知发了吗 +4 youyou5656 2024-06-02 6/300 2024-06-08 07:45 by 996247712
[教师之家] 博士高校求职 安建大vs西科大 +9 chengmy19 2024-06-01 22/1100 2024-06-08 02:40 by 有事学生干
[论文投稿] 求助,锂电池的3区4区英文期刊求助 +7 交界地的懒羊羊 2024-06-06 7/350 2024-06-08 02:23 by 明明在
[硕博家园] 这样的课题组值得去吗 +4 hyeooon 2024-06-07 4/200 2024-06-07 17:29 by l2436368060
[论文投稿] 一般很空的审稿意见大家一般是怎么回复的 +4 mage9162 2024-06-05 5/250 2024-06-07 06:20 by mage9162
[论文投稿] 论文大修语言问题 +6 ayyjy 2024-06-05 7/350 2024-06-06 16:19 by p-cloud
[电化学] 钠电电解液添加剂 +4 爱抖但不虚 2024-06-04 7/350 2024-06-06 14:08 by 多点关心多点i
[论文投稿] 美国对华为的制裁会影响英文论文发表吗 +6 楚辞mio 2024-06-04 6/300 2024-06-06 06:35 by 贪吃fish
[基金申请] 省基金申请里有一条:近三年申请国家、省自然科学基金项目情况 10+3 asdder 2024-06-03 4/200 2024-06-05 22:34 by xiaoyidao129
[论文投稿] 返修之后,今天with editor状态没变,但是日期更新了,有人知道是怎么回事么? 50+3 huanpo116 2024-06-04 8/400 2024-06-05 21:44 by lucky_my2010
[论文投稿] Industrial lurication and tribology初次投稿被退回求助 5+3 lmjz66 2024-06-05 3/150 2024-06-05 16:32 by wjykycg
[论文投稿] 给编辑发邮件 +3 happy hs 2024-06-03 4/200 2024-06-05 13:51 by p-cloud
[硕博家园] 迷茫毕业季 +5 独孤老狗 2024-06-04 6/300 2024-06-04 22:20 by 独孤老狗
[论文投稿] 编辑对文章提的意见 40+3 qa8386136 2024-06-01 4/200 2024-06-04 09:58 by 1234peng
[论文投稿] 求助大神,Fe和Al离子对MOF都有淬灭,当两种离子共存时,怎么区分两种离子? 10+5 maoxiao 2024-06-02 6/300 2024-06-03 19:35 by maolC
[基金申请] +5 河马の史诗 2024-06-02 5/250 2024-06-02 19:05 by 328838485
信息提示
请填处理意见