你的导师。

细胞表达蛋白后，第一个氨基酸（F-Met）会被deformylase切除。

然鹅，如果表达量大，也有出现该残基不会全被切除，这个时候可以通过融合表达后切除的方法，得到不含F-Met的蛋白。

去掉该残基盒不去掉该残基引起蛋白性质变化很大的情况有，但极少

首位的甲酰甲硫氨酸(fMet)在胞内能被部分切除，切除的效率受第二位氨基酸侧链的影响较大，不同序列切割率差异比较大。如果你是想要纯化一些均一的不含fMet的目的蛋白做实验，而不是用于大量生产的话，建议你在序列前面融合能完全切除的标签，比如在前面融合DDDDK，纯化后用肠激酶切除，或者融合sumo标签，用ULP1切除，能得到均一的目的蛋白。

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4楼: Originally posted by zsygxh at 2020-09-22 13:24:19
首位的甲酰甲硫氨酸(fMet)在胞内能被部分切除，切除的效率受第二位氨基酸侧链的影响较大，不同序列切割率差异比较大。如果你是想要纯化一些均一的不含fMet的目的蛋白做实验，而不是用于大量生产的话，建议你在序列前 ...

请问您知道大量生产的话，一般用什么方法去除吗？

引用回帖:

5楼: Originally posted by cindyyue19 at 2020-09-22 17:11:57
请问您知道大量生产的话，一般用什么方法去除吗？...

我前面的表述可能有点问题。我本意是想说，如果你是在实验室里，需要几十到几百mg蛋白用于实验研究，那么直接重新构建质粒，在N端连上一个能完全去除的标签就行了，这样简单、方便、高效。如果你是在药企或其它单位，需要大量生产这个蛋白的话，那么需要考虑产量的问题。比如，在菌体表达蛋白总量相当的情况下，融合标签越长，目的蛋白占总蛋白比例就越少，所以产量就越少，而如果你的目的蛋白分子量本身就很小，那影响会更明显。再比如，序列发生变化，表达量也会变化，极端（且常见）情况下甚至不表达。所以如果是生产的情况，建议你尝试构建多种不同的标签，根据实际表达来定夺（需要考虑融合蛋白的表达总量，蛋白结构/活性的变化，副产物对后续工艺的影响等等，比较麻烦）。我前面语境好像在说融合标签不适合生产，其实融合在生物制药生产中是很常见的，这其实只是我表述有问题。其它能够彻底、均一地切除fMet并且不对目的蛋白结构造成影响的方法，目前我不太清楚
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引用回帖:

6楼: Originally posted by zsygxh at 2020-09-25 16:38:59
我前面的表述可能有点问题。我本意是想说，如果你是在实验室里，需要几十到几百mg蛋白用于实验研究，那么直接重新构建质粒，在N端连上一个能完全去除的标签就行了，这样简单、方便、高效。如果你是在药企或其它单位 ...

谢谢！

我们也出现这样的问题，蛋白的甲硫氨酸去除不完全。有文献报道可以使用氨肽酶处理纯化后的蛋白，Aminopeptidase M处理人生长激素(nakagawa1987)。