求教关于 跨外显子 设计引物的问题
我设计引物从来是按照引物设计原理（网上随便找的一大堆东西），但是我现在很纳闷，关于跨外显子设计引物，这到底是为什么呢？
网上的答案是 可以避免基因组DNA污染，我在想，污染什么了？如果跟的基因组DNA结合的话，如果跨了外显子，肯定是结合不上去的，如果没跨外显子，结合上去了，那么，尽管是基因组DNA扩增，扩增出来的仍然是我需要的序列啊（因为没有含内含子，就没有内含子的序列来捣乱了），跟结合在mRNA上有差么？
而如果我扩增的是 RACE，那么下/上游是通用引物，要扩全mRNA,不管在SP设计在哪，都是一样的
也就是说，跨外显子设计引物，实际上我认为只是在 实时定量PCR里才需要的，因为他们确实要了解，目标基因的mRNA在样本中的表达量，而对于要扩增单基因全长，为克隆基因而PCR的话，是不必跨外显子的，
不知道说的对不对？
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京公网安备 11010802022153号
哎，还是我自己来个回答吧。。
还是要跨内含子的，因为。
1.DNA上的外显子拼成mRNA后貌似还要修饰，也就是说就算是外显子，也不全显，有点要被修饰掉，这样就会多出一点mRNA上没有的序列
第2，GDNA上还可能有失效的同源假基因，这样的话，大小都可能相似，只是没有遗传压力的假基因，让你得到的是完全没有意义的序列。
第一点，我还不确定，但是第二点是肯定无误的，
哎，还是我自己来个回答吧。。
还是要跨内含子的，因为。
1.DNA上的外显子拼成mRNA后貌似还要修饰，也就是说就算是外显子，也不全显，有点要被修饰掉，这样就会多出一点mRNA上没有的序列
第2，GDNA上还可能有失效的同源假基因，这样的话，大小都可能相似，只是没有遗传压力的假基因，让你得到的是完全没有意义的序列。
第一点，我还不确定，但是第二点是肯定无误的。