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求教关于 跨外显子 设计引物的问题
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我设计引物从来是按照引物设计原理(网上随便找的一大堆东西),但是我现在很纳闷,关于跨外显子设计引物,这到底是为什么呢? 网上的答案是 可以避免基因组DNA污染,我在想,污染什么了?如果跟的基因组DNA结合的话,如果跨了外显子,肯定是结合不上去的,如果没跨外显子,结合上去了,那么,尽管是基因组DNA扩增,扩增出来的仍然是我需要的序列啊(因为没有含内含子,就没有内含子的序列来捣乱了),跟结合在mRNA上有差么? 而如果我扩增的是 RACE,那么下/上游是通用引物,要扩全mRNA,不管在SP设计在哪,都是一样的 也就是说,跨外显子设计引物,实际上我认为只是在 实时定量PCR里才需要的,因为他们确实要了解,目标基因的mRNA在样本中的表达量,而对于要扩增单基因全长,为克隆基因而PCR的话,是不必跨外显子的, 不知道说的对不对? |
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