24小时热门版块排行榜    

Znn3bq.jpeg
查看: 2008  |  回复: 9
当前主题已经存档。
当前只显示满足指定条件的回帖,点击这里查看本话题的所有回帖

mynameisuu

[交流] 求教关于 跨外显子 设计引物的问题

我设计引物从来是按照引物设计原理(网上随便找的一大堆东西),但是我现在很纳闷,关于跨外显子设计引物,这到底是为什么呢?


网上的答案是 可以避免基因组DNA污染,我在想,污染什么了?如果跟的基因组DNA结合的话,如果跨了外显子,肯定是结合不上去的,如果没跨外显子,结合上去了,那么,尽管是基因组DNA扩增,扩增出来的仍然是我需要的序列啊(因为没有含内含子,就没有内含子的序列来捣乱了),跟结合在mRNA上有差么?


而如果我扩增的是 RACE,那么下/上游是通用引物,要扩全mRNA,不管在SP设计在哪,都是一样的


也就是说,跨外显子设计引物,实际上我认为只是在 实时定量PCR里才需要的,因为他们确实要了解,目标基因的mRNA在样本中的表达量,而对于要扩增单基因全长,为克隆基因而PCR的话,是不必跨外显子的,


不知道说的对不对?
回复此楼

» 猜你喜欢

已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

zhuifeng7000

至尊木虫 (著名写手)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
恩,单独克隆基因而PCR的话,是不必跨外显子的。
7楼2009-09-30 10:53:11
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 10 个回答

mascotte

金虫 (正式写手)

★ ★ ★
mynameisuu(金币+1):谢谢参与
amisking(金币+2,VIP+0): 9-30 08:24
楼主大概听错了,通常说的是跨越内含子设计引物。就是引物的上下游是在不同的外显子上,如果有genomic DNA污染,PCR出来的必然含有内含子片段,比mRNA批出来的片段要大。
2楼2009-09-30 03:45:43
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

bioxixi

木虫 (著名写手)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
引用回帖:
Originally posted by mascotte at 2009-9-30 03:45:
楼主大概听错了,通常说的是跨越内含子设计引物。就是引物的上下游是在不同的外显子上,如果有genomic DNA污染,PCR出来的必然含有内含子片段,比mRNA批出来的片段要大。

应该就是这个意思吧
3楼2009-09-30 08:20:58
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

guyue2885

银虫 (正式写手)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
跨内含子设计引物  避免来自GDNA的干扰,直接得到cDNA片段
5楼2009-09-30 09:00:47
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
普通表情 高级回复 (可上传附件)
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 一志愿华中农业071010,320求调剂 +17 困困困困坤坤 2026-04-14 19/950 2026-04-17 20:08 by 关一盏灯cd
[教师之家] 山东双非院校考核超级无底线,领导幸灾乐祸,教师遭殃恐 +4 qut2026 2026-04-11 8/400 2026-04-17 16:10 by 会飞的猪157
[考研] 0854求调剂 +21 门路摸摸 2026-04-15 25/1250 2026-04-17 15:45 by qzxyhcsy
[考研] 335求调剂 +20 想上岸呀!! 2026-04-12 23/1150 2026-04-17 10:50 by cuisz
[考研] 300求调剂 +11 橙a777 2026-04-15 11/550 2026-04-16 22:43 by cfdbai
[考研] 327求调剂 +26 Xxjc1107. 2026-04-13 29/1450 2026-04-16 10:52 by Espannnnnol
[考研] 290调剂生物0860 +38 哇哈哈,。 2026-04-11 44/2200 2026-04-16 09:52 by cuisz
[考研] 求调剂推荐 +8 小聂爱学习 2026-04-14 8/400 2026-04-16 07:22 by 学员JpLReM
[考研] 一志愿A区211,22408 321求调剂 +6 随心所欲☆ 2026-04-15 7/350 2026-04-15 21:45 by lbsjt
[考研] 生物学调剂 +9 纸扇zhishan 2026-04-13 9/450 2026-04-15 18:28 by AN流800
[考研] 085801电气专硕272求调剂 +19 电气李 2026-04-13 21/1050 2026-04-15 13:37 by 黑科技矿业
[考研] 材料工程281还有调剂机会吗 +43 xaw. 2026-04-11 44/2200 2026-04-15 12:46 by 西北望—风沙
[考研] 271求调剂 +35 2261744733 2026-04-11 41/2050 2026-04-14 15:36 by zs92450
[考研] 105500药学求调剂 +4 x_skys 2026-04-12 4/200 2026-04-14 13:37 by rndfc
[考研] 085600材料与化工329分求调剂 +24 叶zilin 2026-04-13 25/1250 2026-04-14 09:20 by 试管破裂
[考研] 290求调剂 +18 柯淮然 2026-04-12 20/1000 2026-04-13 12:56 by cyh—315
[考研] 339求调剂 +4 hanwudada 2026-04-12 4/200 2026-04-13 12:03 by 蓝云思雨
[考研] +10 李多米lee. 2026-04-12 11/550 2026-04-12 22:58 by yuyin1233
[考研] 调剂结束 +6 floriea 2026-04-12 8/400 2026-04-12 18:13 by zhouxiaoyu
[考研] 求调剂,一志愿材料科学与工程985,365分, +8 材化李可 2026-04-11 10/500 2026-04-12 08:42 by 852137818
信息提示
请填处理意见