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现在抽质粒都是用试剂盒了,手抽都忘了,还是要向大家学习啊!
嫌乙醇效率低,用异丙醇+95%乙醇试试
苯酚氯仿异戊醇应该没有问题啊,加乙醇以后放4度2h或过夜 如果质粒溶在TE之类的盐溶液里,先十分之一体积3M的醋酸钠,混匀再加2倍体积的乙醇或是异丙醇 另外,效率低是你检测的浓度呢,还是肉眼看着沉淀小呢,如果是肉眼看得,建议测一下,因为肉眼不可见的时候,质粒也不一定少,你看到的大大的白色沉淀是因为有残余的蛋白
我也是用这个抽提,效率挺高的,强烈建议无水乙醇要放在-20°,我一般是专门有一小瓶放在-20°中的,如果担心沉淀不好就加完无水乙醇后放在-20°一个小时再离心,这样效果应该挺好的。 预祝实验成功!!!
我们通常用2倍体积无水乙醇然后-80一个小时.效果不错.
可以加入等体积的-20度过夜的异丙醇沉淀DNA 恩,对的 CTAB就这样提
我帮你回答一下吧 首先考虑你的菌的革兰氏阴性还是阳性? 我做阳性菌的,以前提的时候几乎提不出来,后来加入大量溶菌酶,然后过夜处理,解决这一问题。 其次如果TRIS饱和酚,已经氧化了,提DNA 也提不出来,我也遇到过。 第三乙醇这一步一般不会出问题,用冰的无水乙醇会提高你的沉淀效率,有一种情况是已经溶解的DNA,再沉淀时会沉淀不下来,需要调整盐浓度
支持楼上的
冰的异丙醇或无水乙醇沉淀效果好一些,如果不行的话,就是在你倒上清的时候不小心给倒掉了,你可以试着用枪吸出来,吸得时候注意些,试试吧
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现在抽质粒都是用试剂盒了,手抽都忘了,还是要向大家学习啊!
嫌乙醇效率低,用异丙醇+95%乙醇试试
苯酚氯仿异戊醇应该没有问题啊,加乙醇以后放4度2h或过夜
如果质粒溶在TE之类的盐溶液里,先十分之一体积3M的醋酸钠,混匀再加2倍体积的乙醇或是异丙醇
另外,效率低是你检测的浓度呢,还是肉眼看着沉淀小呢,如果是肉眼看得,建议测一下,因为肉眼不可见的时候,质粒也不一定少,你看到的大大的白色沉淀是因为有残余的蛋白
我也是用这个抽提,效率挺高的,强烈建议无水乙醇要放在-20°,我一般是专门有一小瓶放在-20°中的,如果担心沉淀不好就加完无水乙醇后放在-20°一个小时再离心,这样效果应该挺好的。
预祝实验成功!!!
我们通常用2倍体积无水乙醇然后-80一个小时.效果不错.
可以加入等体积的-20度过夜的异丙醇沉淀DNA
恩,对的
CTAB就这样提
我帮你回答一下吧
首先考虑你的菌的革兰氏阴性还是阳性?
我做阳性菌的,以前提的时候几乎提不出来,后来加入大量溶菌酶,然后过夜处理,解决这一问题。
其次如果TRIS饱和酚,已经氧化了,提DNA 也提不出来,我也遇到过。
第三乙醇这一步一般不会出问题,用冰的无水乙醇会提高你的沉淀效率,有一种情况是已经溶解的DNA,再沉淀时会沉淀不下来,需要调整盐浓度