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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 苯酚氯仿异戊醇，无水乙醇沉淀DNA 效率很低怎么办
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yanglinhui

铜虫 (小有名气)

[交流] 苯酚氯仿异戊醇，无水乙醇沉淀DNA 效率很低怎么办

很急，请各位高手指教
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1楼 2009-09-22 10:05:33
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gastrodia

金虫 (正式写手)
沉淀效率低，怎么个低法?你实验大致流程怎样？你不说，大家怎么知道问题是出在哪一步？
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2楼2009-09-22 10:49:52
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guotieying

银虫 (正式写手)
用试剂盒
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本来无一物，何处惹尘埃。
3楼2009-09-22 10:54:20
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holyala

木虫 (著名写手)

砖家
★
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这种操作应该不存在什么效率低的问题吧？~~~我觉得可能倒乙醇的时候容易把沉淀弄掉，这样损失就很大..
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4楼2009-09-22 10:57:06
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MellonCHEN

银虫 (小有名气)
★ ★
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司马诸葛(金币+1,VIP+0): 9-22 14:25
苯酚氯仿异戊醇，无水乙醇沉淀DNA 的效率不会很低的，这个方法很常用的。会不会是你离心后弃上清的时候，把沉淀一起倒掉了。
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5楼2009-09-22 13:16:59
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yanglinhui

铜虫 (小有名气)
加等体积的苯酚氯仿异戊醇,离心取上清，再加入十分之一体积的醋酸钠，之后再加俩倍量的无水乙醇，沉淀20分钟，再离心20分钟，最后70%酒精洗沉淀，最后用水溶解。
这样做回收率只有10%  导师说应该到90%才对呢  做了好多次都达不到
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6楼2009-09-22 16:51:34
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陈思容

铜虫 (正式写手)
★
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我前段时间也是用这种方法提的，不过没用试剂盒，试剂都是自己配的，结果就把Maker跑出来了！现在怀疑是酚：氯仿：异戊醇配置的问题，有哪位高手指导一下
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7楼2009-09-22 17:20:47
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ychh521

木虫 (小有名气)
★
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可以加入等体积的-20度过夜的异丙醇沉淀DNA，也可以加入2倍体积的-20度过夜的无水乙醇沉淀DNA。
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8楼2009-09-22 18:18:03
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hong303030

金虫 (小有名气)
★
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引用回帖:
Originally posted by ychh521 at 2009-9-22 18:18:
可以加入等体积的-20度过夜的异丙醇沉淀DNA，也可以加入2倍体积的-20度过夜的无水乙醇沉淀DNA。

支持楼上的
冰的异丙醇或无水乙醇沉淀效果好一些，如果不行的话，就是在你倒上清的时候不小心给倒掉了，你可以试着用枪吸出来，吸得时候注意些，试试吧
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9楼2009-09-22 22:43:56
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zhuifeng7000

至尊木虫 (著名写手)
★
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现在抽质粒都是用试剂盒了，手抽都忘了，还是要向大家学习啊！
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10楼2009-09-22 23:11:01
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