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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 苯酚氯仿异戊醇，无水乙醇沉淀DNA 效率很低怎么办
汕头大学海洋科学接受调剂
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dyyyyy

铁杆木虫 (著名写手)
★
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嫌乙醇效率低，用异丙醇+95%乙醇试试
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11楼2009-09-23 07:26:04
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bioxixi

木虫 (著名写手)
★
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苯酚氯仿异戊醇应该没有问题啊，加乙醇以后放4度2h或过夜
如果质粒溶在TE之类的盐溶液里，先十分之一体积3M的醋酸钠，混匀再加2倍体积的乙醇或是异丙醇
另外，效率低是你检测的浓度呢，还是肉眼看着沉淀小呢，如果是肉眼看得，建议测一下，因为肉眼不可见的时候，质粒也不一定少，你看到的大大的白色沉淀是因为有残余的蛋白
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12楼2009-09-23 08:28:11
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經天

铁杆木虫 (著名写手)
我也是用这个抽提，效率挺高的，强烈建议无水乙醇要放在-20°，我一般是专门有一小瓶放在-20°中的，如果担心沉淀不好就加完无水乙醇后放在-20°一个小时再离心，这样效果应该挺好的。
预祝实验成功！！！
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一种与世无争的上进，内在的坚毅和质朴无华的大度！【穷吾一生而追求之！】
13楼2009-09-23 14:41:17
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yuanbo934

至尊木虫 (著名写手)
★
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我们通常用2倍体积无水乙醇然后-80一个小时.效果不错.
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14楼2009-09-23 14:59:59
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蓝皮鼠7983

至尊木虫 (文坛精英)

飞过蓝天
可以加入等体积的-20度过夜的异丙醇沉淀DNA
恩，对的
CTAB就这样提
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海到尽头天做岸，山登绝顶我为峰。
15楼2009-09-23 15:10:36
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charon1982

铁杆木虫 (著名写手)
★
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我帮你回答一下吧
首先考虑你的菌的革兰氏阴性还是阳性？
我做阳性菌的，以前提的时候几乎提不出来，后来加入大量溶菌酶，然后过夜处理，解决这一问题。
其次如果TRIS饱和酚，已经氧化了，提DNA 也提不出来，我也遇到过。
第三乙醇这一步一般不会出问题，用冰的无水乙醇会提高你的沉淀效率，有一种情况是已经溶解的DNA，再沉淀时会沉淀不下来，需要调整盐浓度
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帮助虫友，提升自己
16楼2009-09-23 21:30:47
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kitty8682

金虫 (正式写手)
我觉得手抽的比试剂盒效果还要好些，最后一步先用70%的乙醇洗一遍，再用无水乙醇洗
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17楼2009-09-24 09:27:52
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飞侠8683

新虫 (小有名气)
★
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加异丙醇沉淀效率比乙醇要好
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18楼2009-09-24 09:33:06
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