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dyyyyy

铁杆木虫 (著名写手)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
嫌乙醇效率低,用异丙醇+95%乙醇试试
11楼2009-09-23 07:26:04
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bioxixi

木虫 (著名写手)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
苯酚氯仿异戊醇应该没有问题啊,加乙醇以后放4度2h或过夜
如果质粒溶在TE之类的盐溶液里,先十分之一体积3M的醋酸钠,混匀再加2倍体积的乙醇或是异丙醇
另外,效率低是你检测的浓度呢,还是肉眼看着沉淀小呢,如果是肉眼看得,建议测一下,因为肉眼不可见的时候,质粒也不一定少,你看到的大大的白色沉淀是因为有残余的蛋白
12楼2009-09-23 08:28:11
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經天

铁杆木虫 (著名写手)

我也是用这个抽提,效率挺高的,强烈建议无水乙醇要放在-20°,我一般是专门有一小瓶放在-20°中的,如果担心沉淀不好就加完无水乙醇后放在-20°一个小时再离心,这样效果应该挺好的。
预祝实验成功!!!
一种与世无争的上进,内在的坚毅和质朴无华的大度!【穷吾一生而追求之!】
13楼2009-09-23 14:41:17
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yuanbo934

至尊木虫 (著名写手)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
我们通常用2倍体积无水乙醇然后-80一个小时.效果不错.
14楼2009-09-23 14:59:59
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蓝皮鼠7983

至尊木虫 (文坛精英)

飞过蓝天

可以加入等体积的-20度过夜的异丙醇沉淀DNA
恩,对的
CTAB就这样提
海到尽头天做岸,山登绝顶我为峰。
15楼2009-09-23 15:10:36
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charon1982

铁杆木虫 (著名写手)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
我帮你回答一下吧
首先考虑你的菌的革兰氏阴性还是阳性?
我做阳性菌的,以前提的时候几乎提不出来,后来加入大量溶菌酶,然后过夜处理,解决这一问题。
其次如果TRIS饱和酚,已经氧化了,提DNA 也提不出来,我也遇到过。
第三乙醇这一步一般不会出问题,用冰的无水乙醇会提高你的沉淀效率,有一种情况是已经溶解的DNA,再沉淀时会沉淀不下来,需要调整盐浓度
帮助虫友,提升自己
16楼2009-09-23 21:30:47
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kitty8682

金虫 (正式写手)

我觉得手抽的比试剂盒效果还要好些,最后一步先用70%的乙醇洗一遍,再用无水乙醇洗
17楼2009-09-24 09:27:52
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飞侠8683

新虫 (小有名气)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
加异丙醇沉淀效率比乙醇要好
18楼2009-09-24 09:33:06
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