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沉淀效率低,怎么个低法?你实验大致流程怎样?你不说,大家怎么知道问题是出在哪一步?
这种操作应该不存在什么效率低的问题吧?~~~我觉得可能倒乙醇的时候容易把沉淀弄掉,这样损失就很大..
苯酚氯仿异戊醇,无水乙醇沉淀DNA 的效率不会很低的,这个方法很常用的。会不会是你离心后弃上清的时候,把沉淀一起倒掉了。
加等体积的苯酚氯仿异戊醇,离心取上清,再加入十分之一体积的醋酸钠,之后再加俩倍量的无水乙醇,沉淀20分钟,再离心20分钟,最后70%酒精洗沉淀,最后用水溶解。 这样做回收率只有10% 导师说应该到90%才对呢 做了好多次都达不到,
我前段时间也是用这种方法提的,不过没用试剂盒,试剂都是自己配的,结果就把Maker跑出来了!现在怀疑是酚:氯仿:异戊醇配置的问题,有哪位高手指导一下
可以加入等体积的-20度过夜的异丙醇沉淀DNA,也可以加入2倍体积的-20度过夜的无水乙醇沉淀DNA。
沉淀效率低,怎么个低法?你实验大致流程怎样?你不说,大家怎么知道问题是出在哪一步?
这种操作应该不存在什么效率低的问题吧?~~~我觉得可能倒乙醇的时候容易把沉淀弄掉,这样损失就很大..
苯酚氯仿异戊醇,无水乙醇沉淀DNA 的效率不会很低的,这个方法很常用的。会不会是你离心后弃上清的时候,把沉淀一起倒掉了。
加等体积的苯酚氯仿异戊醇,离心取上清,再加入十分之一体积的醋酸钠,之后再加俩倍量的无水乙醇,沉淀20分钟,再离心20分钟,最后70%酒精洗沉淀,最后用水溶解。
这样做回收率只有10% 导师说应该到90%才对呢 做了好多次都达不到,
我前段时间也是用这种方法提的,不过没用试剂盒,试剂都是自己配的,结果就把Maker跑出来了!现在怀疑是酚:氯仿:异戊醇配置的问题,有哪位高手指导一下
可以加入等体积的-20度过夜的异丙醇沉淀DNA,也可以加入2倍体积的-20度过夜的无水乙醇沉淀DNA。