关于基因敲除（仅仅是插入还是需要置换）？
刚刚看了一篇论文，在基因敲除的时候，仅仅是在染色体上需要敲除的基因内部插入一个抗性基因，而没有用抗性基因置换下需要敲除的基因，这样是不是这个基因和抗性基因会同时转录？
是仅仅在需要敲除的基因内部插入好还是置换下来好呢？还是这两种方法都可以，没有区别呢？
望老鸟给与指导，谢谢！
插入敲除跟置换敲除在试验操作及难度上差不多吧，置换敲除只不过是构建质粒时切除部分基因再连入抗性基因而已。
因为我的基因内部只有一个合适的位点，其他的位点不适于做敲除，要不就是靠基因两端太远，要不太近。所以只能插入了，插入的抗性基因会不会掉下来造成恢复突变呢？
同时请问如何根据试验目的选择敲除方法呢，我的目的就是使基因不能表达（最好连没活性的蛋白也不能表达），该用什么方法？
[ Last edited by caiqingchong on 2009-6-3 at 11:00 ]
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京公网安备 11010802022153号
敲除实际是让原基因或其表达产物（酶）失去活性，这种活性的丧失可以是基因的置换，基因的启动变换，也可以是表达产物活性的丧失，这要看你做什麽了，根据你的实验设计合适的敲除方法。
，
当然是置换好了.
插入型也容易回复突变.
被敲楚的基因或许会转录,但是蛋白产物是没有功能的.
插入也可以灭活一个基因，而且在有的时候只能这么做
因为置换的效率太低了
插入的抗性基因是带有完整的启动子和终止子的完整基因，它是能自己转录翻译的，而被插入的基因很有可能提前终止，转录不完全而没有活性，丧失该基因的功能。
置换好啊。长了不少见识
所谓的基因敲除,就是让该基因不表达或表达了没活性.插入\置换都行.基因内插入抗性基因，等于把该基因阻断了，该基因不能表达。
插入抗性基因使原来的基因不能正常的连续读框，基因也就失活了，抗性基因应该更有利于筛选吧。