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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 关于基因敲除（仅仅是插入还是需要置换）？
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caiqingchong

木虫 (著名写手)

[交流] 关于基因敲除（仅仅是插入还是需要置换）？

刚刚看了一篇论文，在基因敲除的时候，仅仅是在染色体上需要敲除的基因内部插入一个抗性基因，而没有用抗性基因置换下需要敲除的基因，这样是不是这个基因和抗性基因会同时转录？

是仅仅在需要敲除的基因内部插入好还是置换下来好呢？还是这两种方法都可以，没有区别呢？

望老鸟给与指导，谢谢！

插入敲除跟置换敲除在试验操作及难度上差不多吧，置换敲除只不过是构建质粒时切除部分基因再连入抗性基因而已。

因为我的基因内部只有一个合适的位点，其他的位点不适于做敲除，要不就是靠基因两端太远，要不太近。所以只能插入了，插入的抗性基因会不会掉下来造成恢复突变呢？

同时请问如何根据试验目的选择敲除方法呢，我的目的就是使基因不能表达（最好连没活性的蛋白也不能表达），该用什么方法？

[ Last edited by caiqingchong on 2009-6-3 at 11:00 ]
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1楼 2009-06-01 15:51:04
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lauren180

木虫 (著名写手)

小木虫挖井人
★ ★ ★
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amisking(金币+2,VIP+0):支持一下！ 6-1 17:24
敲除实际是让原基因或其表达产物（酶）失去活性，这种活性的丧失可以是基因的置换，基因的启动变换，也可以是表达产物活性的丧失，这要看你做什麽了，根据你的实验设计合适的敲除方法。
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细推物理须行乐。
2楼2009-06-01 16:13:29
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克隆大虾

铁杆木虫 (著名写手)
★
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当然是置换好了.
插入型也容易回复突变.
被敲楚的基因或许会转录,但是蛋白产物是没有功能的.
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3楼2009-06-01 16:13:54
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zhaocy8903

木虫 (知名作家)
★
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插入也可以灭活一个基因，而且在有的时候只能这么做
因为置换的效率太低了
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4楼2009-06-01 17:09:08
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jqq1985

银虫 (正式写手)
★
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插入的抗性基因是带有完整的启动子和终止子的完整基因，它是能自己转录翻译的，而被插入的基因很有可能提前终止，转录不完全而没有活性，丧失该基因的功能。
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5楼2009-06-01 18:49:51
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Charlie1331

金虫 (正式写手)
★
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置换好啊。长了不少见识
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6楼2009-06-01 19:21:36
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生物之渊

铜虫 (小有名气)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
所谓的基因敲除,就是让该基因不表达或表达了没活性.插入\置换都行.基因内插入抗性基因，等于把该基因阻断了，该基因不能表达。
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7楼2009-06-01 19:40:17
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seven5650

铜虫 (小有名气)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
插入抗性基因使原来的基因不能正常的连续读框，基因也就失活了，抗性基因应该更有利于筛选吧。
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8楼2009-06-01 19:44:07
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ilaveu

木虫 (著名写手)
★
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引用回帖:
Originally posted by zhaocy8903 at 2009-6-1 17:09:
插入也可以灭活一个基因，而且在有的时候只能这么做
因为置换的效率太低了

是呀
打靶效率还是太低了
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9楼2009-06-01 19:49:29
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yuanfeng

金虫 (小有名气)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
还好吧  我们用red重组系统时替换效率挺高的，挺好筛选的
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10楼2009-06-01 21:53:05
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