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caiqingchong

木虫 (著名写手)

[交流] 关于基因敲除(仅仅是插入还是需要置换)?

刚刚看了一篇论文,在基因敲除的时候,仅仅是在染色体上需要敲除的基因内部插入一个抗性基因,而没有用抗性基因置换下需要敲除的基因,这样是不是这个基因和抗性基因会同时转录?

是仅仅在需要敲除的基因内部插入好还是置换下来好呢?还是这两种方法都可以,没有区别呢?

望老鸟给与指导,谢谢!

插入敲除跟置换敲除在试验操作及难度上差不多吧,置换敲除只不过是构建质粒时切除部分基因再连入抗性基因而已。

因为我的基因内部只有一个合适的位点,其他的位点不适于做敲除,要不就是靠基因两端太远,要不太近。所以只能插入了,插入的抗性基因会不会掉下来造成恢复突变呢?


同时请问如何根据试验目的选择敲除方法呢,我的目的就是使基因不能表达(最好连没活性的蛋白也不能表达),该用什么方法?

[ Last edited by caiqingchong on 2009-6-3 at 11:00 ]
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lauren180

木虫 (著名写手)

小木虫挖井人

★ ★ ★
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amisking(金币+2,VIP+0):支持一下! 6-1 17:24
敲除实际是让原基因或其表达产物(酶)失去活性,这种活性的丧失可以是基因的置换,基因的启动变换,也可以是表达产物活性的丧失,这要看你做什麽了,根据你的实验设计合适的敲除方法。
细推物理须行乐。
2楼2009-06-01 16:13:29
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克隆大虾

铁杆木虫 (著名写手)


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当然是置换好了.
插入型也容易回复突变.
被敲楚的基因或许会转录,但是蛋白产物是没有功能的.
3楼2009-06-01 16:13:54
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zhaocy8903

木虫 (知名作家)


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插入也可以灭活一个基因,而且在有的时候只能这么做
因为置换的效率太低了
4楼2009-06-01 17:09:08
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jqq1985

银虫 (正式写手)


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插入的抗性基因是带有完整的启动子和终止子的完整基因,它是能自己转录翻译的,而被插入的基因很有可能提前终止,转录不完全而没有活性,丧失该基因的功能。
5楼2009-06-01 18:49:51
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Charlie1331

金虫 (正式写手)


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置换好啊。长了不少见识
6楼2009-06-01 19:21:36
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生物之渊

铜虫 (小有名气)


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所谓的基因敲除,就是让该基因不表达或表达了没活性.插入\置换都行.基因内插入抗性基因,等于把该基因阻断了,该基因不能表达。
7楼2009-06-01 19:40:17
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seven5650

铜虫 (小有名气)


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插入抗性基因使原来的基因不能正常的连续读框,基因也就失活了,抗性基因应该更有利于筛选吧。
8楼2009-06-01 19:44:07
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ilaveu

木虫 (著名写手)


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引用回帖:
Originally posted by zhaocy8903 at 2009-6-1 17:09:
插入也可以灭活一个基因,而且在有的时候只能这么做
因为置换的效率太低了

是呀
打靶效率还是太低了
9楼2009-06-01 19:49:29
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yuanfeng

金虫 (小有名气)


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还好吧  我们用red重组系统时替换效率挺高的,挺好筛选的
10楼2009-06-01 21:53:05
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