求助帖：质粒提取摇菌失败求助
新手第一次做质粒转化，挑菌、提取，做的是PNL-4-3这个质粒，转化使用热激法，质粒+感受态细胞stbl3结合冰浴30min,热激90s，在冰浴2min，加1ml的无抗LB培养基，摇1h，取10ml菌液铺固体培养基，虽然长菌挺密，但可挑出单菌落，然后10ml有抗培养基摇菌，摇了20管，过夜摇菌，浑浊了，然后用天根大抽提试剂盒，富集了将近200ml的菌体，严格按照说明书做，但最后提取出的质粒浓度不到50ng/ul，纯度OD260/280大于2，为什么呢？希望各位虫友解答一下，感谢
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京公网安备 11010802022153号
菌液摇的不够浑，试管摇不开，用锥形瓶
挑克隆后先用5毫升摇菌，保种一毫升。剩下的四毫升提取质粒电泳鉴定。不要一来就大抽。小的证明没问题再大抽。
，
还有涂平板，如果是质粒转化，涂100-200微升菌夜就够了。你10毫升怎么涂的？
同意某楼，1mL LB复苏培养后离心弃900微升，剩余的重悬菌体沉淀涂板，你的为什么是10mL