本人最近在做透明质酸（HA）的羧基与胱胺二盐酸盐（CYS）的氨基生成酰胺的反应。结果打核磁发现CYS并没有接上去。想请教一下各位大佬原因！
1）反应溶剂。因为透明质酸只溶于水，通过参考文献，我选择了pH6.8的磷酸盐缓冲液作为反应溶剂。
2）催化体系。因为NHS水溶性不好，所以我用的是EDC.HCl和HoBt（HoBt是溶解到极少量的DMF中加入的）.
3）活化时间。我选择了搅拌活化2h后再加入CYS

咨询了一些师兄师姐，但是还是没搞明白，有几个问题要问：
1）pH的调节问题。因为EDC.HCl和CYS都带盐酸，所以加入之后反应体系的pH大概下降到5左右。
      有必要通过加入NaOH把pH调回6.8吗？
      有人说EDC.HCl的最佳pH在4-6之间。但是，有人又说pH过酸会影响氨基部分的活性。
2）活化时间。
     催化形成的活性酯在水溶液中是不是非常不稳定，所以我应该缩短活化时间到15min-30min吗？
3）在查阅文献时发现有人用的EDC.HCl/sulfo-NHS，sulfo-NHS的水溶性比NHS要好些，但是跟HoBt相比，价格实在是有点过高了。
     但是从机理上分析HoBt和sulfo-NHS的作用都是相同的。我有必要改用sulfo-NHS吗？

马上就要研三了。疫情耽误了三个月的实验时间。现在材料合成不出来，整个人非常着急，求求有过经验的大家给出一些有用的意见！感激不尽！！@liuanan@liubin 返回小木虫查看更多