用0.4mmol/l的IPTG16度诱导过夜,蛋白都以包涵体的形式存在,为了增加蛋白的可溶性,有没有人有好的建议 返回小木虫查看更多
可以用低温诱导表达,28℃ 4-5小时或者16℃表达过夜、IPTG从0.1mM-1.0mM拉个梯度,摇床转速180转/min,这样不会让外源基因合成太快,可以减少包涵体蛋白形成。
换成融合蛋白表达载体吧,比如pet32a
可以用低温诱导表达,28℃ 4-5小时或者16℃表达过夜、IPTG从0.1mM-1.0mM拉个梯度,摇床转速180转/min,这样不会让外源基因合成太快,可以减少包涵体蛋白形成。
换成融合蛋白表达载体吧,比如pet32a
这个温度诱导表达时间不长,蛋白如果降解的话一般是有蛋白酶的存在。产生包涵体跟降不降解没有关系,你可以再摸一下IPTG的浓度,如果一直没有办法解决的话,那可以纯化包涵体再做蛋白复性
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或者还可以换一个表达载体