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pET28a蛋白表达

作者 18考研sun
来源: 小木虫 250 5 举报帖子
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用0.4mmol/l的IPTG16度诱导过夜,蛋白都以包涵体的形式存在,为了增加蛋白的可溶性,有没有人有好的建议

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  • 精华评论
  • HLYY

    可以用低温诱导表达,28℃ 4-5小时或者16℃表达过夜、IPTG从0.1mM-1.0mM拉个梯度,摇床转速180转/min,这样不会让外源基因合成太快,可以减少包涵体蛋白形成。

  • biosci

    换成融合蛋白表达载体吧,比如pet32a

  • HLYY

    引用回帖:
    4楼: Originally posted by 18考研sun at 2019-10-16 14:03:22
    我是用的16度诱导过夜的,会不会存在诱导时间过长蛋白降解的可能
    ...

    这个温度诱导表达时间不长,蛋白如果降解的话一般是有蛋白酶的存在。产生包涵体跟降不降解没有关系,你可以再摸一下IPTG的浓度,如果一直没有办法解决的话,那可以纯化包涵体再做蛋白复性

  • HLYY

    引用回帖:
    4楼: Originally posted by 18考研sun at 2019-10-16 14:03:22
    我是用的16度诱导过夜的,会不会存在诱导时间过长蛋白降解的可能
    ...

    或者还可以换一个表达载体

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