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-Dawn

铜虫 (初入文坛)

[求助] 抗菌实验大肠杆菌阴性对照组菌落难生长,求解 已有2人参与

我是按照QBT-2591-2003 的贴膜法实验步骤进行抗菌实验
做了两次大肠杆菌均未生长,只是有的样品偶尔出现一两个菌落,而且其中有阴性对照组也没有菌落形成
后来单独做了一下阴性对照组,结果菌液直接涂覆在琼脂培养基上的时候能看出有菌生长图1,然而滴在培养皿上PE膜覆盖,滴入定量生理盐水保证湿度,37℃培养24h后,洗脱下来再涂覆到琼脂培养基上培养过后并没有明显生长,图2.图3.
而同样操作下的金黄色葡萄球菌是可以生长的。图4
求助各位大神,到底是哪里出现了问题
实验所用的培养皿是清洗晾干后报纸包好高温高压灭菌后使用的,而且已烘干,使用时候拆包的
镊子和涂布棒也是高温高压灭菌,用之前用酒精灯灭菌,放在洁净培养皿上自然降温的
试剂按照标准里的配制,ph值用酸度计测定ph=7
PE膜酒精洗过然后去离子水清洗,最后放在紫外照射2h的报纸上无菌台风干
培养的时候有用封口膜封好
求教各位大神,是哪个环节出错最有可能出现这样的情况,这个实验周期好长,做了好多次不知道原因,心好累

抗菌实验大肠杆菌阴性对照组菌落难生长,求解
图1.直接涂覆在琼脂培养基上的大肠杆菌


抗菌实验大肠杆菌阴性对照组菌落难生长,求解-1
图2.洗脱培养后的大肠杆菌侧面观察


抗菌实验大肠杆菌阴性对照组菌落难生长,求解-2
图3.洗脱培养后的大肠杆菌直视观察


抗菌实验大肠杆菌阴性对照组菌落难生长,求解-3
图4金黄色葡萄球菌阴性对照组
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海森严

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

大肠杆菌直接涂敷没有看见侧视图和正视图,不知道和图2和图3是否一样,如果都差不多的话,会不会是大肠杆菌浓度过高或者涂敷得过多导致没有观察到菌落,而金黄色葡萄球菌接种密度刚好合适。只是猜测,仅供参考
请看下面
2楼2016-05-31 09:28:33
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xizim

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

请问楼主的问题解决了吗?我现在也在做贴膜法抑菌试验,我的情况是阴性(空平板)不长菌落,无抗菌性的样品长菌落,有抗菌性的样品不长菌落。做了两次阴性都不长菌落,求指教
3楼2018-04-20 14:24:31
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曳影

金虫 (著名写手)

找一个好一点的阴性对照,最好有标品的那种。或者你的菌对阴性样本敏感,或者大肠杆菌没有洗下来

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隐去黄泉三千丈,再见当年少年郎
4楼2018-04-21 19:52:12
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曳影

金虫 (著名写手)

我觉得你可以加大菌量试试,菌状态不好的可能性也有

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隐去黄泉三千丈,再见当年少年郎
5楼2018-04-21 19:52:43
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rgqmuchong

铁虫 (初入文坛)

引用回帖:
3楼: Originally posted by xizim at 2018-04-20 14:24:31
请问楼主的问题解决了吗?我现在也在做贴膜法抑菌试验,我的情况是阴性(空平板)不长菌落,无抗菌性的样品长菌落,有抗菌性的样品不长菌落。做了两次阴性都不长菌落,求指教

你好,请问你贴膜法的问题解决了吗,我也遇到了同样的问题。
6楼2021-08-19 08:34:35
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