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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 微生物 » 实验/技术 » 抗菌实验大肠杆菌阴性对照组菌落难生长，求解
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-Dawn

铜虫 (初入文坛)

[求助] 抗菌实验大肠杆菌阴性对照组菌落难生长，求解 已有2人参与

我是按照QBT-2591-2003 的贴膜法实验步骤进行抗菌实验
做了两次大肠杆菌均未生长，只是有的样品偶尔出现一两个菌落，而且其中有阴性对照组也没有菌落形成
后来单独做了一下阴性对照组，结果菌液直接涂覆在琼脂培养基上的时候能看出有菌生长图1，然而滴在培养皿上PE膜覆盖，滴入定量生理盐水保证湿度，37℃培养24h后，洗脱下来再涂覆到琼脂培养基上培养过后并没有明显生长，图2.图3.
而同样操作下的金黄色葡萄球菌是可以生长的。图4
求助各位大神，到底是哪里出现了问题
实验所用的培养皿是清洗晾干后报纸包好高温高压灭菌后使用的，而且已烘干，使用时候拆包的
镊子和涂布棒也是高温高压灭菌，用之前用酒精灯灭菌，放在洁净培养皿上自然降温的
试剂按照标准里的配制，ph值用酸度计测定ph=7
PE膜酒精洗过然后去离子水清洗，最后放在紫外照射2h的报纸上无菌台风干
培养的时候有用封口膜封好
求教各位大神，是哪个环节出错最有可能出现这样的情况，这个实验周期好长，做了好多次不知道原因，心好累

抗菌实验大肠杆菌阴性对照组菌落难生长，求解
图1.直接涂覆在琼脂培养基上的大肠杆菌


抗菌实验大肠杆菌阴性对照组菌落难生长，求解-1
图2.洗脱培养后的大肠杆菌侧面观察


抗菌实验大肠杆菌阴性对照组菌落难生长，求解-2
图3.洗脱培养后的大肠杆菌直视观察


抗菌实验大肠杆菌阴性对照组菌落难生长，求解-3
图4金黄色葡萄球菌阴性对照组
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1楼 2016-05-27 10:46:48
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海森严

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

大肠杆菌直接涂敷没有看见侧视图和正视图，不知道和图2和图3是否一样，如果都差不多的话，会不会是大肠杆菌浓度过高或者涂敷得过多导致没有观察到菌落，而金黄色葡萄球菌接种密度刚好合适。只是猜测，仅供参考
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请看下面
2楼2016-05-31 09:28:33
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xizim

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

请问楼主的问题解决了吗？我现在也在做贴膜法抑菌试验，我的情况是阴性（空平板）不长菌落，无抗菌性的样品长菌落，有抗菌性的样品不长菌落。做了两次阴性都不长菌落，求指教
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3楼2018-04-20 14:24:31
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曳影

金虫 (著名写手)
找一个好一点的阴性对照，最好有标品的那种。或者你的菌对阴性样本敏感，或者大肠杆菌没有洗下来

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隐去黄泉三千丈，再见当年少年郎
4楼2018-04-21 19:52:12
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曳影

金虫 (著名写手)
我觉得你可以加大菌量试试，菌状态不好的可能性也有

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隐去黄泉三千丈，再见当年少年郎
5楼2018-04-21 19:52:43
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rgqmuchong

铁虫 (初入文坛)
引用回帖:
3楼: Originally posted by xizim at 2018-04-20 14:24:31
请问楼主的问题解决了吗？我现在也在做贴膜法抑菌试验，我的情况是阴性（空平板）不长菌落，无抗菌性的样品长菌落，有抗菌性的样品不长菌落。做了两次阴性都不长菌落，求指教

你好，请问你贴膜法的问题解决了吗，我也遇到了同样的问题。
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6楼2021-08-19 08:34:35
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