16SrDNA菌落PCR产物电泳无条带
我又来了
我用菌落PCR扩增3个菌的16SrDNA条带，之前没有用10微升dd水稀释菌落，结果电泳条带很糊，后来稀释了，结果有一个菌跑出了条带，另外两个没有条带，重复实验时，都没有条带了，求各位大佬帮帮忙分析一下。
只有最后面的条带是我的，前面那个跑出的条带是另一个人的，我们用的试剂和体系都一样，他做了两个菌，只跑出这一个条带，前面的没有条带的6个孔是我新做的，都没有跑出条带，最后一个是我之前做的，跑出一个条带，然后点样孔很亮的是一个菌，也不知道什么原因，感觉它跑不出去
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感觉跑的蛮好的，比我强，说明体系摸索的蛮不错，P不出来就是引物不合适或者酶延伸困难等原因吧，先试试用高保真做一遍吧，说不定就有条带了呢，taq一般不适合扩16s吧。我们现在都是用高保真扩的，taq改良型的应该也行，不过总体感觉不如高保真，
如果菌落pcr出不来的话，你可以试试提一下基因组，会好很多
对了，问一下，菌落PCR前，你是热裂的么，100度多少分钟啊，需要知道这个，可能裂解不完全呢
我没有热裂解，只是挑了单菌落，然后10微升dd水稀释后吸取1微升菌液于PCR体系里，然后做PCR
我后来多做了几个平行管，总算有个别出条带了