有没有做过考马斯亮蓝测蛋白质含量的同学
我按100mg亮蓝，50mL无水乙醇，100mL85%磷酸定容至1000ml，做出来的染液是蓝绿色的，继续添加磷酸至红棕色。添加的磷酸量没有定量。
用这个测紫外，空白参比用蒸馏水，测的吸光度在671左右。
用染液做参比，测量加了10微克和40微克的样品，几乎没有峰。（加蛋白质溶液时有生成蓝色，但是又消失了，应该是浓度不够的原因吧）
请问我应该怎么做啊？加了蛋白质的溶液颜色几乎没有变化的。
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楼主有没有找到原因呢，我们最近也在做这个实验，遇到了同样的情况
1.不知道楼主用的染料是不是考马斯亮蓝G250，用酒精溶解时不太好溶，可以多吹打几次使染料尽量完全溶解：
2.染料配置好了之后，用0.45um过滤器过滤之后，遮光4℃放置，尽量在一个月之内用完：
3.做标曲的时候选择牛血清白蛋白为标准，制备浓度在1-0.1mg/ml；
4.充分混匀样品（标准）与染色剂，结合5-10min测定，1h之内测定，时间久了会出现蓝色结晶，一般染料结合后染色很明显而且结合时间很久
5.时间过程注意避光，