ELISA方法学请教
各位大神好,最近建立了一个间接ELISA方法,阴性值、P/N值、OD值都还好,请各位高手和老师对以下问题给与指点:
(1) 什么样的标曲较好,线性、二项式、指数等哪种好,为什么?
(2) 有人说线性好,那么线性曲线对斜率有没有要求?感觉斜率太低还不如多项式。
(3) 有公司用四参数拟合曲线,不知道这个是不是很好?为什么用的较多?
(4) 目前的酶标仪灵敏度都说在3左右,是不是没必要控制标曲上限的OD值在1.5左右?我感觉上限在2.5以下就可以,不知对不对?
(5) 请各位老师帮我解释一下为什么很多ELISA方法要求阳性值在1-1.2,难道只是从机器灵敏度(机器的线性)和光吸收损失(如果颜色深读数时会有损失)角度考虑吗,万分感谢!!这个问题困扰我很长时间。
(6) 条件优化过程中,综合分析标准曲线、P/N值、阴性值时哪个更重要?感觉如果阴性不高,P/N说的过去的话,主要还是看标曲,不知道对不对?
(7) 如果想从研发试剂盒角度评价一下这个ELISA方法,准确性、重复性、精密度、专属性、定量限、检出限、回收率等试验够了吗,,有没有相关行业标准、规定或参考材料,敬请指点!!!!
祝大家万事如意,越来越好。 邮箱:448234046@qq.com
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今日热帖
我们用四参数拟合,上限值控制在2一下
谢谢你
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直接看相关指导原则,FDA EMA 中国药典都有关于LBA方法学的要求,基本上这里面的要求算是方法学的最严格要求了。
谢谢!!!
顶
《中国药典》2015年版四部摘要: 9012 生物样品定量分析方法验证指导原则,美国FDA最新版本的Guidance for Industry Bioanalytical Method Validation,是比较严格的标准。