体系我一般用10或者20 uL（有点多哦）
除了酶和buffer体积固定，片段和载体根据浓度来分配。

越小碰撞几率越大嘛，相同浓度条件下，另：宝生物这个连接酶做粘端还行，说明书也没说平端要怎么做。我买过FERMENTAS的做过比较，它上面说酶用量加五倍，各种连接按照推荐体系，一下就连上了。后来也用粘端做过对比，宝生物的克隆只有不到的人家的三分一，效率不怎么样阿…

体积小并不是碰撞几率大吧？这个应该是和浓度相关的。体积小，所以连接的片段浓度也高。

相同浓度下…

大体系酶切，小体系连接，10ul连接体系，0.5ul载体，加大目的片段浓度，我们通常用这个体系，挺好用的！

我们一般用10微升，如果连得上就能上，10微升足够了；如果连不上再多也无益。