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质粒上的基因敲除与染色体上的基因敲除有什么区别吗？

作者 william9798: 来源: 小木虫 400 8 举报帖子

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我需要敲除的基因在一个菌的质粒上，采用同源重组的方法，插入一个抗性基因使其失活。我不知道操作方法与染色体上的基因敲除方法是不是一样的？有什么区别吗？能提供相关文献最好，谢谢返回小木虫查看更多

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yguang

本质上没区别，质粒上应该选择更多一些，比如要敲除的基因内部如果有相同酶切位点的，直接用这个酶切后连接即得到此基因部分缺失的突变，在质粒上也很方便做点突变，好多试剂盒都可以做好几个点的突变！
william9798

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2楼: Originally posted by yguang at 2011-08-13 00:33:30:
本质上没区别，质粒上应该选择更多一些，比如要敲除的基因内部如果有相同酶切位点的，直接用这个酶切后连接即得到此基因部分缺失的突变，在质粒上也很方便做点突变，好多试剂盒都可以做好几个点的突变！

我是通过同源重组的方法构建打靶载体，然后二亲接合，倒入受体菌中，与受体菌株的野生型质粒上的目的基因发生双交换，达到使该基因失活的目的
，
yguang

引用回帖:
3楼: Originally posted by william9798 at 2011-08-13 00:41:59:
我是通过同源重组的方法构建打靶载体，然后二亲接合，倒入受体菌中，与受体菌株的野生型质粒上的目的基因发生双交换，达到使该基因失活的目的。

是啊，这是最常规的方法啊！
lwq652

其实体内质粒重组有点难度的，因为涉及质粒的拷贝数，如果是单拷贝的，那么跟基因组差不多，但是如果是多拷贝的，那么只要有一个重组了就显示抗性了
2011sp

引用回帖:
1598975楼: Originally posted by lwq652 at 2012-04-05 11:56:40:
其实体内质粒重组有点难度的，因为涉及质粒的拷贝数，如果是单拷贝的，那么跟基因组差不多，但是如果是多拷贝的，那么只要有一个重组了就显示抗性了

这个不是问题
coreopsisy

引用回帖:
1598975楼: Originally posted by lwq652 at 2012-04-05 11:56:40:
其实体内质粒重组有点难度的，因为涉及质粒的拷贝数，如果是单拷贝的，那么跟基因组差不多，但是如果是多拷贝的，那么只要有一个重组了就显示抗性了
这个不是问题

为什么说不是问题，1598975说的问题确实存在，若要敲除质粒中的上的一个基因，若质粒是多拷贝，部分质粒上基因能被敲除，部分仍含有此段基因的质粒仍能存在，敲除工作不能成功，，
coreopsisy

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1599077楼: Originally posted by 2011sp at 2012-04-05 15:24:31
这个不是问题...

为什么说不是问题，1598975说的问题确实存在，若要敲除质粒中的上的一个基因，若质粒是多拷贝，部分质粒上基因能被敲除，部分仍含有此段基因的质粒仍能存在，敲除工作不能成功，，