最近在看三亲本接合的文献,想不明白,氯霉素不是能够抑制细菌生长吗,为什么在受体菌,辅助菌,供体菌三者混合之前,要单独添加氯霉素?这样做的意义是什么,不怕把受体菌杀死了吗?忘大神赐教 返回小木虫查看更多
没有人吗,在网上查询这个怎么都没有查到答案。。
氯霉素好像可以抑制菌体生长,从而达到质粒高拷贝的目的,质粒上面应该有这个抗性
单独加是为了保持质粒复制,结合的时候你要是担心这个抗性影响受体菌可以把供体菌或者帮助菌离心去除培养基,用新鲜的LB洗两次就ok。结合转移之前单独添加抗生素对结合转移影响并不是很大,加是为了维持质粒复制,不加其实影响也不大,单纯培养到对数期很快的。
没有人吗,在网上查询这个怎么都没有查到答案。。
氯霉素好像可以抑制菌体生长,从而达到质粒高拷贝的目的,质粒上面应该有这个抗性
单独加是为了保持质粒复制,结合的时候你要是担心这个抗性影响受体菌可以把供体菌或者帮助菌离心去除培养基,用新鲜的LB洗两次就ok。结合转移之前单独添加抗生素对结合转移影响并不是很大,加是为了维持质粒复制,不加其实影响也不大,单纯培养到对数期很快的。
我之前做的结合转移目的只是为了将外源的质粒转入受体菌。外源质粒可以在受体菌种复制的话,有两种情况,一是在受体菌中稳定复制传代,另外就是与受体菌本身的的染色体DNA发生整合或者同源双交换。后边在LB培养基中添加抗生素培养受体菌,也是为了使转入受体菌中的质粒能够稳定复制传代。我是这么理解的,有不对的话请批评指正
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即使外源DNA整合在染色体上,虽然抗性没那么容易丢失,但添加抗生素可以使其抗性传代稳定性增强。