【求助】求助关于土壤蛋白酶和蔗糖酶测定所遇到的问题
最近我在做土壤蛋白酶和蔗糖酶的测定,蛋白酶是用改良与茚三酮法测定(沈仁芳),蔗糖酶使用的3,5-二硝基水杨酸显色法测定。但是遇到诸多问题,在此向做过这两种酶的前辈(高手)请教一下 还望指点迷津:
(1)蛋白酶测定时在加了培养液后变浑浊,加显色剂沸水浴后出现大量絮状沉淀,且呈茶色,未成所预期的蓝紫色(有时出现了也是在沉淀中去了)。
(2)蔗糖酶 在加了显色剂后无基质对照的颜色要深很多,用分光光度计的比色上,处理组为负值。 返回小木虫查看更多
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负值是不是因为蔗糖酶含量低,或者是你保温不好使酶活性失效。
我记得我们都是在冰浴的条件下做这个酶活性测定的,37度会不会高了点
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蔗糖酶要做无基质和无土壤两组对照,无土壤的对照应该没什么问题,无基质就是不加蔗糖以去除土壤中原有的葡萄糖的影响。因此理论上是不可能颜色较处理组深的。建议你再做一遍,此外,如果蔗糖酶活性确实比较低,你可以吸取2ml滤液显色后测定。
37度高了!这么明显的问题!25度就够了!钱交出来!