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蛋白样品较浑浊,选用什么方法或者试剂盒测量蛋白含量比较准确

作者 386TLJ
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蛋白样品较浑浊,选用什么方法或者试剂盒测量蛋白含量比较准确,请大家多多指教,谢谢

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  • 晋鹏

    1、定氮法,双缩尿法(Biuret法)、Folin-酚试剂法(Lowry法)和紫外吸收法.考马斯亮蓝法(Bradford法).

    2、凯氏定氮 灵敏度低,适用于0.1.0mg氮,误差为 ±2% 费时
    10小时 将蛋白氮转化为氨,用酸吸收后滴定 非蛋白氮(可用三氯乙酸沉淀蛋白质而分离) 用于标准蛋白质含量的准确测定;干扰少;费时太长
    3、双缩脲法(Biuret法) 灵敏度低 20mg 中速 20~30分钟 多肽键+碱性Cu2+®紫色络合物 硫酸铵;Tris缓冲液;某些氨基酸 用于快速测定,但不太灵敏;不同蛋白质显色相似
    4、紫外吸收法 较为灵敏 50~100mg 快速 10分钟 蛋白质中的酪氨酸和色氨酸残基在280nm处的光吸收 各种嘌吟和嘧啶;
    5、Folin-酚试剂法(Lowry法) 灵敏度高 5mg 慢速 40~60分钟 双缩脲反应;磷钼酸-磷钨酸试剂被Tyr和Phe还原 硫酸铵;Tris缓冲液;甘氨酸;
    各种硫醇 耗费时间长;操作要严格计时;颜色深浅随不同蛋白质变化
    6、考马斯亮蓝法(Bradford法) 灵敏度最高 5mg 快速5~15分钟 考马斯亮蓝染料与蛋白质结合时,其lmax由465nm变为595nm 强碱性缓冲液;
    SDS 最好的方法;干扰物质少;颜色稳定; 颜色深浅随不同蛋白质变化,

  • zinfly

    凯氏定氮,或者杜马斯定氮,
    后者毕竟方便简单。

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